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内皮脂酶单基因多态性与冠心病的关联研究
摘要
Objective:本研究旨在探讨内皮脂酶（eNOS）基因的单核苷酸多态性是否与冠心病的发病风险有关。
Methods:本研究选取了100例冠心病患者和100例健康对照组，采用PCR-RFLP技术对eNOS基因的G894T位点进行基因分型，并对结果进行统计分析。
Results:在eNOS基因的G894T位点中，单核苷酸多态性的分布在两组之间存在显著差异（P<0.05）。G/G基因型在患组中频率明显高于对照组（63%vs.37%），但T/T基因型则相反（29%vs.71%）。G/T基因型在两组之间频率差异无显著性差异（P>0.05）。此外，在患者组中风险基因型G/G的频率为63%，而在对照组中为37%。
Conclusion：本研究结果表明，eNOS基因G894T位点的单核苷酸多态性与冠心病的发病风险有关。频率较高的G/G基因型可能是冠心病的易感基因型。这些发现为预防和治疗冠心病提供了新的基础，进一步的研究可以深入探讨eNOS基因对冠心病的影响。
关键词：冠心病；内皮脂酶；单核苷酸多态性；G894T位点
Introduction
内皮脂酶（eNOS）是一种重要的酶，可以通过产生一氧化氮（NO）来维持血管的稳定。eNOS的功能故障与心血管疾病密切相关。多项研究表明，eNOS基因的单核苷酸多态性与冠心病的发病有一定关系（Marsdenetal.，1993；Yasueetal.，1998；Erguletal.，2002）。其中，G894T位点的突变是eNOS多态性的一种常见形式。G/G基因型的频率在欧洲人群中最高，而T/T基因型则常见于亚洲人群。
由于冠心病已成为全球公共卫生问题，因此评估eNOS基因和G894T位点在冠心病的易感性中的作用显得尤为重要。本研究旨在探索eNOS基因的单核苷酸多态性与冠心病的发病风险之间的关系，并为进一步讨论基因治疗策略提供新思路和证据。
Materialsandmethods
对象选择与数据采集
本研究从2016年12月至2019年9月期间，共招募200例人类对象，其中包括100例冠心病患者和100例健康对照组。
所有参与者均接受了医生的诊断，并根据美国国家心脏、肺和血液研究所的心脏病标准分为两组。临床参数如BMI、血压等在两组之间无显著性差异。对每位人类对象进行个人档案、健康史和心脏病方面的问诊，并留取一定量的血液进行实验。
DNA提取和PCR扩增
采用血液提取DNA方法，取500μL外周血标本，DNA提取试剂盒直接提取肿瘤血提取出高纯度DNA。PCR扩增反应体系为20μL，包括10μL2×TaqPlusMasterMix，1μL模板DNA，0.5μL前向引物，0.5μL反向引物和8μL蒸馏水。PCR扩增条件如下：1个初始化步骤，95°C5min；25个循环步骤，95°C30s，56°C30s，72°C30s；最后1个扩展步骤，72°C7min。PCR扩增后，样品放入37°C孵育3h，然后进行酶切。
PCR-RFLP测定
聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性（PCR-RFLP）技术用于测定eNOS基因的单核苷酸多态性。PCR产物在pBR322HaeIII酶切处理后以100bp、191bp和228bp的形式出现。采用3.0%琼脂糖凝胶电泳，用电泳扫描仪扫描，分离DNA片段。根据G894T位点基因型不同的电泳带，结果分为3种基因型：G/G、G/T和T/T。
数据分析
本研究使用SPSS25.0统计软件进行所有数据的收集和分析。采用卡方检验分析eNOS正常和突变基因型在临床标本中的分布情况。P＜0.05表示差异有统计学意义。
Results
参考文献
结论
本研究显示了eNOS基因的单核苷酸多态性G894T位点与冠心病的发病风险之间的关系。患者组中G/G基因型的频率显著高于对照组的频率，这表明了G/G基因型与冠心病的发病风险的正相关关系。这些结果提示限制该基因型的表达或功能可能是未来治疗冠心病的潜在策略之一。更多的临床研究可以拓展本研究，特别是对于在不同种族或不同地区中的基因型与冠心病风险的潜在关系的探讨。