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人结肠癌耐药细胞系的建立及其耐药相关基因的研究
标题：人结肠癌耐药细胞系的建立及其耐药相关基因的研究
摘要：
结肠癌是一种常见的恶性肿瘤，耐药性是限制其治疗效果的重要因素之一。本研究旨在建立人结肠癌耐药细胞系，并探究其耐药相关基因。通过连续处理结肠癌细胞株HCT116，使用化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）建立了耐药细胞系HCT116/5-FU，并采用细胞增殖实验、转录组测序和生物信息学分析等方法，研究了HCT116/5-FU的基因表达差异及耐药相关基因。结果表明，HCT116/5-FU具有较高的抗药性；基因表达差异分析发现了一系列与耐药性相关的基因，包括ABC转运蛋白家族成员、细胞凋亡相关基因等。本研究结果有助于深入了解结肠癌耐药机制，为其治疗提供新的靶向策略。
关键词：结肠癌；耐药性；细胞系；基因表达
引言：
结肠癌是一种常见的消化系统肿瘤，其发病率和死亡率在全球范围内居高不下。虽然结肠癌的治疗手段不断发展，但耐药性仍然是限制其治疗效果的主要因素之一。耐药性的产生与多种因素有关，包括基因突变、细胞信号通路异常以及肿瘤微环境的变化等。深入研究结肠癌耐药机制，寻找新的治疗靶点，对于提高结肠癌的治疗效果具有重要意义。
方法：
1.细胞系建立
我们选取结肠癌细胞株HCT116作为研究对象，在连续培养中逐渐增加5-氟尿嘧啶（5-FU）的浓度，最终得到耐药细胞系HCT116/5-FU。
2.细胞增殖实验
对HCT116和HCT116/5-FU细胞进行细胞增殖实验，采用MTT法检测细胞生长曲线。
3.转录组测序
提取HCT116和HCT116/5-FU细胞总RNA，构建转录组测序文库，并使用IlluminaHiSeq测序平台进行高通量测序。
4.生物信息学分析
对转录组数据进行差异表达基因分析，寻找与耐药性相关的基因。使用基因本体论（GeneOntology，GO）分析和通路富集分析对差异表达基因进行功能注释与富集分析。
结果：
1.HCT116/5-FU展示出良好的耐药性，细胞增殖实验结果显示其半数抑制浓度（IC50）明显高于HCT116。
2.转录组测序结果发现了大量差异表达基因，包括上调和下调的基因。GO分析显示这些差异表达基因主要与ABC转运蛋白家族、细胞凋亡、细胞生物学过程等方面相关。
3.通路富集分析进一步确认了差异表达基因参与了多种耐药相关通路，如化疗药物转运通路和DNA修复通路等。
讨论：
通过连续处理结肠癌细胞株HCT116，成功建立了耐药细胞系HCT116/5-FU。该细胞系具有较高的抗药性，为深入研究结肠癌耐药机制提供了有力工具。通过转录组测序和生物信息学分析，我们发现了一系列与耐药性相关的基因。这些基因参与了细胞凋亡、化疗药物转运、DNA修复等重要通路。这些结果有助于深入了解结肠癌耐药机制，并为其治疗提供新的靶向策略。
结论：
本研究成功建立了人结肠癌耐药细胞系HCT116/5-FU，并发现了一系列与耐药性相关的基因。这些结果为深入研究结肠癌耐药机制和寻找新的治疗靶点提供了依据。进一步研究应注重探究这些基因在结肠癌发生发展过程中的具体作用及调控机制，为结肠癌个体化治疗提供理论依据。