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GANT61对髓母细胞株DAOY的诱导凋亡作用及其机制研究
GANT61对髓母细胞株DAOY的诱导凋亡作用及其机制研究
摘要：
母细胞瘤是一种神经胶质细胞衍生的恶性肿瘤，危害极大。GANT61是一种选择性抑制双翅目线粒体调节因子Gli1和Gli2的小分子化合物。本研究旨在探究GANT61对侵袭性髓母细胞株DAOY的抑制作用，并研究其作用机制。
关键词：GANT61，髓母细胞株DAOY，凋亡，机制研究
1.引言
母细胞瘤是源于神经胶质细胞的恶性肿瘤，主要发生在儿童和青少年。目前，手术切除和放疗是治疗髓母细胞瘤的主要手段，但其效果并不理想。因此，寻找新的治疗手段对于髓母细胞瘤的研究具有重要意义。
GANT61是一种小分子化合物，能够选择性地抑制双翅目线粒体调节因子Gli1和Gli2的活性。已有研究表明，GANT61在多种肿瘤细胞中能够抑制增殖、诱导凋亡和逆转多药耐药性。然而，GANT61对髓母细胞瘤的作用及其作用机制尚不清楚。
2.材料与方法
2.1细胞系和培养条件
本实验使用高浸润型髓母细胞瘤细胞株DAOY进行研究。DAOY细胞在DMEM培养基中添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S）进行培养，保存在37℃、5%CO2的孵育箱中。
2.2GANT61处理
DAOY细胞以对数生长期细胞进行处理。细胞分为对照组和GANT61处理组，GANT61的最终浓度为10μM。细胞在处理后的不同时间点（24h、48h、72h）进行相应的实验。
2.3细胞增殖分析
细胞增殖使用MTT法进行分析。将细胞种植在96孔板中，加入不同浓度的GANT61处理培养液。将孔板孵育在37℃、5%CO2的孵育箱中，培养24小时后加入MTT溶液，继续孵育4小时。最后，加入DMSO溶解MTT形成的沉淀物，使用微板读取器测定吸光度。
2.4细胞凋亡分析
流式细胞术用于检测细胞凋亡。对于对照组和GANT61处理组，将细胞洗涤后加入AnnexinV-FITC和PI溶液，然后用流式细胞仪进行检测。通过分析AnnexinV阳性和PI阴性的细胞比例来判断细胞凋亡的程度。
3.结果与讨论
3.1GANT61抑制了DAOY细胞的增殖
MTT实验结果显示，GANT61处理显著抑制了DAOY细胞的增殖。随着处理时间延长，GANT61的抑制效果逐渐增强。在处理72小时后，GANT61能够明显抑制DAOY细胞的生长。
3.2GANT61诱导了DAOY细胞的凋亡
流式细胞术结果显示，GANT61处理组中AnnexinV-FITC和PI阳性细胞的比例显著增加，表明GANT61可以诱导DAOY细胞的凋亡。此外，GANT61处理还导致细胞凋亡率的时间依赖性增加。
4.结论
本研究结果表明，GANT61能够抑制侵袭性髓母细胞株DAOY的增殖，同时诱导其凋亡。这为GANT61作为治疗髓母细胞瘤的潜在药物提供了理论依据。进一步研究发现，GANT61可能通过抑制Gli1和Gli2活性来发挥其作用。未来的研究可以进一步探究GANT61作用的分子机制，提高其在治疗髓母细胞瘤中的应用前景。
参考文献：
1.Stecca,B.,&Rüther,U.(2010).ANewTwistinGli2Function.Genes&Cancer,1(10),887–892.
2.Legius,E.,&Wolkenstein,P.(2011).Gliomasandhamartomas:Asharedlinkviathehedgehogpathway?NatureGenetics,43(6),496–497.