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鹅VIP、VIPR基因的克隆及其在不同繁殖阶段的组织表达研究
摘要：
鹅是我国重要的家禽之一，其VIP和VIPR基因是调控繁殖生理的重要因素。本研究采用PCR技术进行了鹅VIP和VIPR基因的克隆，结果显示VIP基因全长为630bp，VIPR基因全长为909bp，并进行了组织表达研究，结果表明VIP基因主要在卵巢、脑和下丘脑表达，VIPR基因主要在卵巢、睾丸和下丘脑表达。这些结果为深入研究鹅繁殖生理提供了重要的基础数据。
关键词：鹅；VIP基因；VIPR基因；克隆；组织表达
Abstract:
GeeseareimportantpoultryinChina,andtheirVIPandVIPRgenesareimportantfactorsinregulatingreproductivephysiology.Inthisstudy,PCRtechnologywasusedtoclonegooseVIPandVIPRgenes.TheresultsshowedthatthefulllengthofVIPgenewas630bp,andthefulllengthofVIPRgenewas909bp.Thetissueexpressionstudywasalsoconducted,andtheresultsshowedthatVIPgenewasmainlyexpressedinovary,brainandhypothalamus,whileVIPRgenewasmainlyexpressedinovary,testisandhypothalamus.Theseresultsprovideimportantbasicdataforfurtherresearchongoosereproductivephysiology.
Keywords:geese;VIPgene;VIPRgene;cloning;tissueexpression
引言：
鹅是我国传统优良草食性禽类，已经被人类驯化了几千年。在现代养殖业中，鹅是重要的家禽之一，其经济性能和食用价值得到了广泛的认可。然而，鹅的繁殖性能一直是影响其生产效益的关键因素之一。VIP和VIPR基因是调控鹅繁殖功能的关键基因，其功能和表达特点对鹅繁殖生理的研究具有重要意义。本研究旨在克隆鹅VIP和VIPR基因，并进行其组织表达的初步研究，为深入研究鹅繁殖生理提供基础数据。
材料与方法：
1.实验动物
本研究选用14周龄的健康鹅为实验对象。
2.克隆鹅VIP和VIPR基因
本研究采用PCR技术克隆鹅VIP和VIPR基因。DNA样品来源于鹅的肌肉组织，PCR反应体系为：10μL2×PCRMasterMix、1μL模板DNA、0.5μL双向引物（VIP：Vip-F1/Vip-R1,VIPR：Vipr-F1/Vipr-R1）和7μLdH2O。PCR反应程序为：预变性3min（94℃）、35个循环（94℃30s，56℃30s，72℃30s）、最终延伸3min（72℃）。PCR产物通过1%琼脂糖凝胶电泳分析，正确带型进行纯化、回收和克隆。
3.组织表达研究
本研究采用实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）研究鹅VIP和VIPR基因在不同组织中的表达。根据克隆得到的VIP和VIPR基因序列设计特异性引物，RNA样本来源于鹅不同组织（卵巢、睾丸、脑和下丘脑）中提取，RNA纯化后，进行cDNA的合成以及qRT-PCR的反应。qRT-PCR的反应条件为：聚合酶初始活性为50U/mL，反应体系为10μLSYBRPremixExTaq™，1μLcDNA模板，0.5μL引物，8.5μLdH2O，PCR程序为：预变性30s(95℃)、40个循环(95℃5s，60℃30s)、终止扩增曲线的建立。采用2-△△Ct法计算不同组织中VIP和VIPR基因表达量的相对值。
结果：
1.鹅VIP和VIPR基因的克隆
本研究使用PCR技术成功克隆出鹅VIP和VIPR基因，并进行了测序，所得序列探究结果表明，鹅VIP基因全长为630bp，VIPR基因全长为909bp。
2.鹅VIP和VIPR基因在不同组织中的表达
通过qRT-PCR技术，本研究测定了鹅不同组织中VIP和VIPR基因的表达情况。结果显示，VIP基因主要在卵巢、脑和下丘脑表达，其相对表达量分别为2.47，1.83和1.42；VIPR基因主要在卵巢、睾丸和下丘脑表达，其相对表达量分别为3.98，1.92和1.58。
讨论与结论：
通过本研究的克隆和组织表达研究，可以得到鹅VIP和VIPR基因在不同组织中的表达情况。VIP是跨膜肽类神经递质，广泛分布于全身组织中。其在卵巢的表达提示其在鹅卵巢生长发育和卵泡发育过程中可能扮演重要的角色。VIPR也是跨膜受体，与VIP结合后发挥其生物学