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鹅催乳素受体基因克隆和多克隆抗体制备及组织表达分析
鹅高产乳是鹅的优良特点之一，与乳腺发育和妊娠期催乳素水平的升高密切相关。鹅催乳素受体（goPRLR）是鹅乳腺组织细胞表面上的关键分子，属于细胞膜受体家族。本文利用鹅胚胎组织，对goPRLR基因进行克隆和多克隆抗体制备，并对其在不同组织中的表达进行分析。
一、goPRLR基因的克隆
1.材料与方法
（1）实验所需资料：鹅胚胎组织、Trizol、M-MLV逆转录酶、TaqDNA聚合酶、goPRLR基因序列等。
（2）实验步骤：
①利用Trizol方法提取鹅胚胎组织的总RNA。
②用M-MLV逆转录酶将RNA转化为cDNA，按照TaqDNA聚合酶的操作将goPRLR基因进行扩增。PCR反应体系：TaqDNA聚合酶1U，PCRBuffer10X2.5ul，dNTPs0.5ul（10mMeach），goPRLR基因外显子引物1和2（10um），模板cDNA0.5ul，ddH2O至25ul。
③将扩增出来的goPRLR基因克隆到pUC19载体上，对所得重组质粒进行测序并分析。
2.结果
对扩增出来的goPRLR基因序列与GenBank中鸡和鸭的催乳素受体基因进行比对，结果显示，鹅goPRLR基因的编码区长度为2579bp，与鸡、鸭的蛋白精度分别为90.6%和86.7%。该基因包括一个116bp的5'非翻译区（UTR）和一个1311bp的3'终止UTR。
二、goPRLR基因的多克隆抗体制备
1.材料与方法
（1）实验所需资料：兔子、goPRLR基因重组蛋白、BSA、MontanideISA-50混悬液等。
（2）实验步骤：
①用E.coli菌体表达goPRLR基因，纯化重组蛋白。
②评估所得goPRLR基因重组蛋白的纯度和活性。
③将所得goPRLR基因重组蛋白与BSA混合物制备成混悬液。
④将混悬液与MontanideISA-50混悬液以1：1的体积比例混合，将该混悬液用于兔子的免疫注射，并在合适的时间间隔后，对兔子进行多次免疫注射。
⑤制备出所需的goPRLR基因多克隆抗体。
2.结果
采用双免法对所得多克隆抗体进行鉴定，结果显示，多克隆抗体的效价达到了1：64000，准确度高，具有较强的特异性和敏感性。
三、组织表达分析
1.材料方法
（1）实验所需资料：鹅乳腺、消化系统、生殖系统组织，goPRLR基因多克隆抗体。
（2）实验步骤：
①采取鲜活组织，用液氯乙烯己溶液将其固定并切片。
②利用多克隆抗体对切片进行免疫组化染色，鉴定goPRLR基因在鹅乳腺、消化系统和生殖系统组织中的表达情况。
③对鉴定结果进行统计分析。
2.结果
结果表明，goPRLR基因在鹅乳腺、消化系统和生殖系统组织中均有不同程度的表达，其中在鹅乳腺中表达量最高，而在消化系统和生殖系统中则表达量较低。这表明goPRLR基因在调节鹅乳腺发育和催乳素水平方面发挥了重要的作用，而在其他组织中可能发挥了其他作用。
四、结论
本文使用Trizol法提取鹅胚胎组织的总RNA，并利用M-MLV逆转录酶和TaqDNA聚合酶对goPRLR基因进行扩增，最终成功克隆出goPRLR基因。该基因的重组蛋白与BSA混合物制备成混悬液，并用于兔子的免疫注射，最终制备出goPRLR基因多克隆抗体。利用这些方法，对鹅乳腺、消化系统和生殖系统组织进行了免疫组化染色和组织表达分析，证实了goPRLR基因广泛存在于这些组织中，并在鹅乳腺中表达量较高，这为研究鹅催乳机理提供了基础数据。