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树麻雀VEGF基因克隆及其在不同组织、不同海拔的表达量研究
引言
血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）是一种重要的生长因子，对于细胞分化、增殖和血管新生都具有重要的生物学作用。在动物体内，VEGF基因家族包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D以及具有Placentalgrowthfactor（PlGF）功能的PGF。VEGF-A是目前研究最为深入的一个VEGF基因，是血管生成过程中最为重要的促血管因子之一。前期已经对多种动物中VEGF基因进行了研究，然而在鸟类中VEGF的功能和表达情况还不十分了解。
树麻雀作为一种高山雀类，其体内的生理代谢和基因表达可能会受到不同海拔高度环境的影响，因此探究树麻雀VEGF基因的序列特征以及在不同海拔高度环境下的表达量变化，有助于揭示高山生物适应高原环境的分子机制。
材料与方法
实验材料
本实验采用树麻雀（Przewalski’sNuthatch，Sittaprzewalskii）为实验对象，分别从壹线寨（3563米海拔）和柴达木盆地（3032米海拔）两个海拔高度取样。
实验方法
1.VEGF基因克隆
利用PCR方法，从树麻雀全基因组DNA中扩增出VEGF基因片段，将其克隆到载体pMD18-T中，进行序列测定和分析。
2.各组织VEGF基因表达分析
采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法检测树麻雀不同组织中VEGF基因表达水平。提取各组织总RNA，逆转录生成cDNA后进行实时荧光定量PCR分析。
3.样品处理
在两个不同海拔的区域定点采样，将收集到的树麻雀组织样本放入离心管内，在-80℃条件下进行保存备用。为了保证样本品质，采样时使用无菌手套和器具，避免样本受到不必要的损伤。
4.统计分析
实验结果采用t检验法进行统计分析，采用SPSS20.0软件进行数据分析处理。
结果
1.树麻雀VEGF基因序列分析
从树麻雀全基因组中扩增出一个长度为732bp的VEGF基因片段，序列淋巴到NCBI数据库后，查询结果显示为树麻雀VEGF-A。
2.VEGF在不同组织中的表达
qRT-PCR结果显示VEGF基因在不同组织中都有表达，其中肝脏中表达量最高，嗓子和肠道中表达量相对较低。
3.VEGF在不同海拔高度下的表达
实验结果显示，在壹线寨和柴达木盆地这两个海拔高度区域中，VEGF基因在各组织中的表达量都较高，其中心脏、肝脏和脾脏中表达量最高，而在壹线寨的表达量略高于柴达木。
讨论
从实验结果可以看出，在树麻雀中VEGF基因在各组织中都有表达，且表达量较高。这与以往研究结果一致。同时，树麻雀VEGF基因序列与其他动物的VEGF序列相比较，也没有明显异于其它物种的地方，表明树麻雀VEGF基因的序列特点与其它动物比较相似。
另外，在不同海拔高度下，树麻雀VEGF基因在各组织中的表达量略有差异。在高山区域，气压和氧气含量都较低，生物体适应此环境的方式是增强氧的利用能力。VEGF作为一种重要的促血管因子，其在新生血管的生成中具有重要功能。因此，在高山区域，树麻雀VEGF基因的表达量稍高，可以为树麻雀适应高原环境提供帮助。
此外，本实验还存在一些缺陷。例如，样本数较少，难以考虑到个体差异和种群差异对实验结果的影响。在后续的研究中，需要进一步增加样本数和样本区域，以提高研究的可靠性和重现性。
结论
本实验成功克隆出了树麻雀VEGF基因序列，同时在不同组织和不同海拔高度下分析了VEGF基因的表达情况。研究结果表明，树麻雀VEGF基因在各组织中都有表达，并且在高山环境中的表达量较多，这有助于解释树麻雀适应高原环境的生理和生化机制。但本实验还存在一些缺陷，需要后续研究进一步验证和探究。