玫瑰和野蔷薇WOX家族基因的克隆及表达载体构建.docx

玫瑰和野蔷薇WOX家族基因的克隆及表达载体构建
玫瑰和野蔷薇WOX家族基因的克隆及表达载体构建
TheCloningandExpressionVectorConstructionofWOXFamilyGenesinRosesandWildRoses
摘要
玫瑰和野蔷薇作为农业和园艺中主要的经济作物和美化植物，对它们的遗传改良和分子生物学研究的需求日益增加。WOX家族基因作为植物的主要调控因子，在各种生物学过程中发挥着重要的作用。本研究获得了玫瑰和野蔷薇WOX家族基因的基因序列，构建了可表达的载体，并在真菌（Agrobacteriumtumefaciens）感染的空心菜和转化的烟草中进行了表达。结果表明，构建的表达载体能够正确地表达玫瑰和野蔷薇WOX家族基因，为进一步探究这些基因的功能提供了重要的工具。
关键词：WOX家族基因；克隆；表达载体；玫瑰；野蔷薇
Abstract
Rosesandwildrosesareeconomicallyimportantcropsandornamentalplantsinagricultureandhorticulture,andthedemandfortheirgeneticimprovementandmolecularbiologyresearchisincreasing.WOXfamilygenes,asthemainregulatoryfactorsinplants,playimportantrolesinvariousbiologicalprocesses.Inthisstudy,weobtainedthegenesequencesofWOXfamilygenesinrosesandwildroses,constructedexpressionvectors,andexpressedtheminthefungus(Agrobacteriumtumefaciens)-infectedhollowcabbageandtransformedtobacco.TheresultsshowedthattheconstructedexpressionvectorscouldcorrectlyexpresstheWOXfamilygenesinrosesandwildroses,providingimportanttoolsforfurtherexploringthefunctionsofthesegenes.
Keywords:WOXfamilygenes;cloning;expressionvector;roses;wildroses
引言
玫瑰（Rosaspp.）和野蔷薇（Rosarugosa）是蔷薇科（Rosaceae）中最著名的植物，它们广泛应用于经济作物和园艺植物方面。作为园林用植物，其中种类繁多、造型优美、花姿各异，受到各国园艺爱好者的喜爱。玫瑰种植业在全球范围内约有100年的历史，不断有新品种被引种、改良和繁育。玫瑰在国际贸易中占有重要地位，而野蔷薇则以其耐寒和抗病性能而受到认可，被广泛用于观赏和防护林化方面（Shulaevetal.,2008;Fengetal.,2020）。
WOX家族基因是植物中一系列重要的调控因子，参与调节植物生长和发育的多个方面。有研究表明，WOX家族基因参与了胚胎发育、根和茎的形成、花器官和生殖器官的发生等多个过程（Nardmann&Reisewitz,2015）。目前，已经鉴定了多个植物物种中的WOX家族基因，然而对于玫瑰和野蔷薇中的WOX家族基因的研究还相对较少。
本研究的目的是获得玫瑰和野蔷薇中WOX家族基因的基因序列，构建可表达的载体，并进行表达分析。通过本研究的实验，将为玫瑰和野蔷薇的基因功能研究提供重要的工具和信息。
材料与方法
材料
采集自不同玫瑰和野蔷薇品种的新叶和绿色枝条。
E.coliDH5α（TransGen，北京）和AgrobacteriumtumefaciensGV3101（WeidiBio，上海）。
空心菜（Nicotianabenthamiana）和烟草（Nicotianatabacum）组织。
Trizol试剂盒（Invitrogen，美国）和NUClean试剂盒（CWBIO，中国）。
PrimeScriptRTMasterMix（TaKaRa，日本）和PfuDNAPolymerase（SangonBiotech，中国）。
pEASY-T1克隆载体、pCAMBIA-1301表达载体（Novoprotein，中国）。
方法
玫瑰和野蔷薇WOX家族基因的克隆
从玫瑰和野蔷薇的新叶和绿色枝条中取得总RNA，使用Trizol试剂盒进行RNA提取和纯化。得到的RNA样品进行DNAseI酶消化处理，随后使用PrimeScriptRTMa