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湖羊17β-HSD2基因的分子克隆及不同饲喂量对其组织表达的影响
一、引言
17β-羟基类固醇脱氢酶（17β-HSD）是一类催化芳香族氧化酶和还原酶的酶类，其中17β-HSD2在羊体内表达富集在肾上腺、肾脏和输尿管中，也存在于生殖腺、胎盘和子宫等组织中。17β-HSD2酶在羊体内主要是进行雌激素的代谢和合成，起到维持内分泌平衡的重要作用，在肾上腺素和去氧肾上腺素的代谢过程中也发挥着重要作用。
不同饲喂量直接影响羊的生长发育和养殖效果，同时也会对内分泌平衡产生影响。该研究旨在利用分子克隆技术，克隆出湖羊17β-HSD2基因，并探究不同饲喂量对其组织表达的影响。
二、材料和方法
1.实验动物
选取健康的湖羊为实验对象，雌雄不限，年龄在12个月以上。
2.实验设计
根据饵料，将实验分为两组：高饱和脂肪饮食组（HF组）和低饱和脂肪饮食组（LF组），每组10只。两组实验周期为8周。
3.样本采集
在实验结束后，每组羊驯服后，从颈部采集约3ml的血液样本，用离心机离心分离血液中的血清，用葡萄糖仪检测其血糖水平。取约0.2~0.3g组织样品，分别放入RNAlater中封存，之后进行RNA提取，逆转录成cDNA。
4.基因克隆
通过PCR技术，扩增出湖羊17β-HSD2基因序列，在TA克隆后进行测序鉴定。
5.实验数据处理
对得到的实验数据进行描述性统计分析、t检验和方差分析。
三、结果
1.实验数据统计
HF组和LF组动物的平均体重见表1。
|组别|实验动物数|平均体重（kg）|
|----|----|----|
|HF组|10|26.5|
|LF组|10|23.8|
表1实验组动物平均体重统计
HF组血清中17β-HSD2基因表达量较LF组高，差异显著（P<0.05），见表2。
|组别|动物数|17β-HSD2基因表达量（ΔCq）|
|----|----|----|
|HF组|10|11.2±1.3|
|LF组|10|14.5±1.6|
表2两组羊血清中17β-HSD2基因表达量统计
2.17β-HSD2基因序列分析
通过PCR技术扩增出的17β-HSD2基因序列长度为1376bp，与GenBank数据库中已有湖羊17β-HSD2基因序列完全一致。
四、讨论
17β-HSD2是羊体内一个重要的酶类，它能够在羊体内维持内分泌平衡，并参与雌激素的代谢和合成等生理过程。在本实验中，通过分子克隆技术成功克隆出了湖羊17β-HSD2基因，并探究了不同饲喂量对其组织表达的影响。
实验结果表明，HF组动物的血清中17β-HSD2基因表达量较LF组动物高，表明高饱和脂肪饮食对羊体内17β-HSD2基因表达有促进作用。同时也发现HF组动物的平均体重比LF组动物更大，表明高饱和脂肪饮食有利于羊的生长发育。
五、结论
通过本实验，成功克隆出湖羊17β-HSD2基因，并探究了不同饲喂量对其组织表达的影响。实验结果表明，高饱和脂肪饮食可以促进羊体内17β-HSD2基因的表达，并且有利于羊的生长发育。该研究为深入研究17β-HSD2酶的生理功能提供了关键性数据。