抗人MASP2-C蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用.docx

抗人MASP2-C蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用
摘要
抗人MASP2-C蛋白单克隆抗体是一种针对人类补体激活途径脆弱性相关蛋白MASP2-C的特异性单克隆抗体。本研究通过免疫大鼠，获得多个单克隆抗体株系，经过筛选，最终确定一个高亲和力的单克隆抗体LC-1D10，并对其进行了鉴定和初步应用。结果显示，LC-1D10能够特异性地结合MASP2-C蛋白，且具有较高的抗原结合力和稳定性。在细胞表面表达的MASP2-C亚型鉴定试验中，LC-1D10能够明显地识别到MASP2-C亚型。此外，LC-1D10的中和效应实验表明，其具有明显的抑制MASP2-C的效果。因此，这种抗人MASP2-C单克隆抗体有望成为研究和治疗相关疾病的有效工具。
关键词：抗人MASP2-C单克隆抗体；免疫大鼠；抗原结合力；细胞表面鉴定；中和效应
Abstract
Antibodiesareimportantresearchtoolsforinvestigatingproteinfunction,andinthisstudy,wedevelopedandcharacterizedamonoclonalantibodytargetinghumanMASP2-Cprotein.Multiplemonoclonalantibodyclonesweregeneratedthroughimmunizationofrats,followedbyscreeningtoidentifyahigh-affinityclone,designatedLC-1D10.ThisantibodyspecificallyboundtoMASP2-Cprotein,andexhibitedhighantigenbindingstrengthandstability.LC-1D10couldalsoclearlyidentifyMASP2-Csubtypesincellsurfaceexpressionassaysanddemonstratedamarkedneutralizingeffect.Thus,thismonoclonalantibodymayserveasaneffectivetoolforthestudyandtreatmentofrelateddiseases.
Keywords:humanMASP2-Cmonoclonalantibody;ratimmunization;antigenbindingstrength;cellsurfaceidentification;neutralizationeffect.
介绍
人体内存在三条不同的补体激活途径，分别是经典途径、替代途径和凝集素-激酶样途径。MASP2（mannan-bindinglectin-associatedserineprotease2）是凝集素-激酶样途径中的一个重要成员，在该途径的激活中起重要作用。MASP2被激活后，会通过切割的方式激活C4和C2，从而导致补体的激活。MASP2-C是一种新发现的MASP2变构体，与一些疾病发生有关联。因此，针对MASP2-C蛋白的研究对于相关疾病的治疗具有重要意义。
单克隆抗体是一种特异性、稳定性较高的研究工具，可用于检测特定分子的存在和定量，也可用于治疗特定疾病。本研究旨在开发一种针对人类MASP2-C蛋白的单克隆抗体，并对其进行鉴定和初步应用。
材料与方法
动物
SD雄性大鼠
试剂
人类MASP2-C蛋白；亲和力纯化Ni柱；SDS-PAGE胶；Westernblot试剂盒；ELISA试剂盒；
方法
1）SD雄性大鼠的免疫和多克隆抗体的筛选
合成MASP2-C文件，选择合适的多肽抗原进行免疫SD雄性大鼠，并通过ELISA检测血清中抗体的产生情况。根据ELISA结果，选择发生免疫应答的大鼠进行后续筛选。
2）抗体的纯化和鉴定
从大鼠的脾脏中获得脾细胞，制备混合免疫细胞融合物。通过ELISA和免疫印迹对融合物进行筛选，得到具有高亲和力的单克隆抗体。使用亲和力纯化Ni柱对单克隆抗体进行纯化，然后用SDS-PAGE和Westernblot分析抗体的纯度和大小。使用ELISA检测单克隆抗体对MASP2-C蛋白的特异性和抗原结合力，并评估抗体的稳定性。
3）抗体的应用
使用Westernblot和细胞表面鉴定试验检测单克隆抗体对MASP2-C亚型的识别情况。同时，使用中和试验评价抗体的中和效果。
结果
1）SD雄性大鼠的免疫和多克隆抗体的筛选
通过ELISA检测血清中抗体，得到多个发生免疫应答的大鼠血清。选择其中亲和力较高的大鼠进行多肽融合。
2）抗体的纯化和鉴定
通过ELISA和免疫印迹，得到一个具有高亲和力的单克隆抗体LC-1D10。使用亲和力纯化Ni柱对单克隆抗体进行纯化，得到