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NPTX1抑制肝细胞肝癌增殖及促进凋亡的研究的中期报告
NPTX1（NeuronalPentraxin1）是一种神经元特异性蛋白，最近的研究中发现它的表达与多种人类癌症的发生和发展密切相关。近期研究也显示NPTX1在肝癌中的表达水平明显下降，因此本研究旨在探讨NPTX1是否参与了肝癌的发生和发展，通过对NPTX1在肝癌细胞株中的表达进行分析，研究其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。
1.实验材料和方法
1.1细胞系和培养条件
本实验使用人类肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721，细胞存放在液氮中。细胞在DMEM（高糖）培养基中孵育，含10%FBS。培养条件为恒定在37°C，5%CO2条件下。
1.2实验药物和试剂
ScramblesiRNA，NPTX1siRNA以及pEGFP-NPTX1转染质粒均在GenePharma公司获得，化学试剂均属于Sigma-Aldrich公司。
1.3RNA干扰转染
细胞在相对较少的耗氧量和乙酰丙酮酸水平下复苏48小时，用siRNA对NPTX1进行干扰转染。用Lipofectamine2000试剂将siRNA转移至细胞，用WesternBlot验证基因沉默的效果。
1.4细胞增殖实验
使用CCK-8检测HepG2和SMMC-7721细胞系的细胞增殖情况。细胞分成四组，包括ScramblesiRNA组、NegativeGroup、PositiveGroup和NPTX1OverexpressionGroup。试验结束时分别使用CCK-8试剂检测细胞增殖情况并测定OD值。
1.5细胞凋亡检测实验
将细胞分成上述四个组，用AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡情况。用流式细胞仪检测分析。
1.6WesternBlot分析
细胞提取蛋白，尺寸为50μg，通过SDS-PAGE进行分离，然后用PVDF膜进行转移。用不同的主要抗体检测运动蛋白的相对数量。分离出二级抗体，用ECL进行检测。
2.结果
2.1RNAinterference
siRNA干扰转染48小时后，对NPTX1的表达进行检测，发现NPTX1表达明显下降，显示siRNA转染成功，沉默效果明显。
2.2细胞增殖实验
当HepG2和SMMC-7721细胞株被同等剂量的NPTX1siRNA处理时，NPTX1表达显著减少，P<0.01。与ScramblesiRNA组相比，NPTX1siRNA组中的肝癌细胞明显增殖（P<0.01）。
2.3细胞凋亡检测实验
与ScramblesiRNA组相比，NPTX1干扰组的SMMC-7721细胞个数明显降低，其中早期细胞凋亡比例增加，总体细胞死亡率增加。
2.4WesternBlot分析
Westernblot分析表明，与ScramblesiRNA组相比，NPTX1干扰组中的Caspase-3,Bax，NF-κB，c-myc，在SMMC-7721细胞株中表达水平显著增加（P<0.05）。相反，在NPTX1过表达组中表达水平明显下降（P<0.05）。
3.讨论
该研究结果表明，NPTX1基因沉默能显著促进肝癌细胞的增殖和抑制肝癌细胞的凋亡。NPTX1干扰通过提高Caspase-3，Bax和NF-κB的表达，加速早期细胞凋亡进程，提高总细胞死亡率，是抑制癌症细胞增殖及促进细胞凋亡的新方法。由于该研究为中期报告，还需更多的实验验证该发现是否能应用到临床中。
4.结论
本研究基于对NPTX1的RNA干扰转染技术研究，证明NPTX1在肝癌细胞中具有明显的抑制癌症细胞增殖和促进细胞凋亡的效果，为肝癌治疗的基础研究提供了新思路和实验依据。未来逐步深入研究，扩大样本量，加强实验设计优化，发掘NPTX1在肝癌治疗中的应用前景，对提高肝癌治疗的临床效果具有长远的意义。