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人脂肪间充质干细胞的分离、培养、鉴定及体外向黑素细胞定向分化的研究
人脂肪间充质干细胞的分离、培养、鉴定及体外向黑素细胞定向分化的研究
背景
人类皮肤的色素细胞主要由黑素细胞构成，其可产生黑色素，为我们的皮肤、毛发、眼睛等组织提供色素，具有较高的生物功能和医学意义。而黑素瘤等疾病的发生、皮肤白化等症状的缓解与黑色素形成有密切的关系。因此，寻找一种大量、可靠、安全的黑素细胞来源一直是生命科学领域的热门方向。干细胞由于其自我更新、多向分化、具有强大的再生能力等特点，在诸多疾病治疗、组织工程、药物筛选等方面都具有广泛的应用前景。而脂肪间充质干细胞（adipose-derivedmesenchymalstemcell，ADMSC）作为一种来源广泛、萃取简单、多样性大、成本低廉的干细胞类型，逐渐引起了科学家们的关注。
目的
本文旨在介绍如何从人脂肪组织中分离出ADMSC，建立稳定的细胞培养系统并进行细胞鉴定，最终利用某些分化因子，实现ADMSC向黑素细胞的定向分化过程。
方法
1.人脂肪组织样本的提取和处理
从临床患者中提取脂肪组织样本，将其清洗干净后，分别切割成0.5cm³大小的碎片，加入消化酶并在恒温摇床上消化约40分钟，酶消化液中包括牛血清白蛋白20%、胰酶0.075%、DNaseI2.5mg/L。将样本放在离心管中，通过离心的方式分离细胞组织，将细胞再次洗涤并在生长培养液中进行培养。
2.ADSC的体外培养
样本的分离完成后，在一定条件下培养ADSC。生长培养液中包括Dulbecco改良的Eagle培养基（DMEM）和10-15%所需脐带血清。ADSC在室温下过滤、稀释、平板塑料培养、微量试管培养等情况下进行培养，直至生成稳定的细胞系为止。
3.ADSC的鉴定
将细胞进行流式细胞术检测，检测细胞的多能性和其他相关标记物，如CD90、CD105、CD146，CD34、CD45等等。
4.ADSC向黑素细胞的定向分化
在含DMEM和10-15%FBS的生长培养液中加入分化因子，如乙酰胆碱、N-苯基-N'-丙基尿嘧啶、D-(+)-葡萄糖、α-酮戊酸和酪氨酸等，培养14-21天，细胞就会形成黑色素。
结果
成功分离出ADSC，并建立了稳定的细胞培养系统和鉴定方法。在含分化因子的生长培养液中进行的细胞定向分化实验中，利用基因表达定量PCR和其他分子生物学方法，发现经分化的细胞可以分泌黑色素素，具有典型的黑素细胞特征，表示成功完成细胞定向分化过程。
讨论
ADMSC可以通过各种方式提取，但目前的常规方法主要是通过脂肪抽取，获得比较纯净的脂肪组织样本，然后运用消化酶对组织进行消化。培养ADSC时需要一定的适应条件和相关培养基，选择合适的培养条件直接影响到最终的培养效果。在进行ADSC鉴定时采用多因素鉴定会更为准确，这些指标可归为两大类，即表面功能分子和多能分化潜能；在定向分化实验中，已有研究表明定向分化过程中的分化因子和培养时间等因素对细胞分化结果具有重要影响。
结论
总的来说，本研究建立了针对ADSC的一系列分离、培养、鉴定以及定向分化实验。通过这些方法，不仅可以为相关的疾病治疗和组织工程提供成熟的基础技术，同时也能够更加深入地理解ADSC的多向分化特性，为干细胞领域的研究拓宽了思路。