小鼠脂肪间充质干细胞的分离、鉴定与成肌诱导分化研究的任务书.docx

小鼠脂肪间充质干细胞的分离、鉴定与成肌诱导分化研究的任务书
任务书
一、课题背景
随着生物技术的日益发展，脂肪干细胞因其来源多样（可以从多个体部位获得，如腹部、臀部等），提取和培养方便，且具有良好的增殖和多向分化能力而成为近年来研究的热点之一。其中脂肪间充质干细胞（Adipose-derivedMesenchymalStemCells，简称ADMSCs）在治疗器官损伤、软组织损伤及修复、骨质缺损的再生医学领域具有很大的潜力。然而，随着研究的深入，研究人员发现，由于不同来源的脂肪组织中，ADMSCs的分布以及表面标志物的表达不同，因此，在使用ADMSCs这一治疗手段前，需要对其进行细胞学鉴定和质量控制等方面的工作，尤其是在构建组织，进行排异反应和延长细胞的存活时间方面更为关键。因此，本研究拟分离、鉴定实验室内小鼠脂肪组织中的ADMSCs，并通过成肌诱导分化的实验验证其特性。
二、研究内容
（一）小鼠脂肪间充质干细胞的分离
1.搜集小鼠脂肪组织样品：通过实验室内小鼠的解剖手段或外科手术获得小鼠腹部、臀部等部位的脂肪组织，将组织放入无菌PBS中，将组织在2h内送至实验室进行进一步处理。
2.消化脂肪组织：将收集到的脂肪组织剁碎后加入含0.1%胰酶和0.05%胆汁酸的无菌PBS液中，将样品在37℃的
孵化箱中和胶体化并制成细胞单体悬浮液。
3.离心收集细胞：将胶体化的细胞悬浮液离心，去除胰酶和胆汁酸后的上清液，将沉淀细胞加入培养基中，放置在CO2培养箱中进行培养。
（二）小鼠脂肪间充质干细胞的鉴定
1.形态学特征：通过显微镜观察细胞形态学特征，如细胞形态，细胞增殖情况等。
2.免疫表型鉴定：通过流式细胞术(Flowcytometry)技术鉴定脂肪干细胞的免疫表型，如检测CD29、CD44、CD45、CD73、CD90和CD105表达等。
（三）小鼠脂肪间充质干细胞的成肌诱导分化
针对已鉴定的脂肪干细胞，进行成肌诱导分化实验，以证明其多向分化能力。在自行配制成肌诱导培养基，添加不同浓度的诱导剂进行分化，使用油红O和肌动蛋白抗体定位结构分析其分化结果。
三、基本要求
1.精确制备实验材料，并做好标记和保存。
2.安全操作，注意消毒和个人卫生。
3.学习和掌握细胞分离、鉴定、诱导分化技术，正确操作，避免错误产生。
4.实验过程中注意科学、严谨、认真、耐心，做好实验记录，及时整理和归档实验数据。
5.根据实验结果撰写科学、准确、清晰的实验报告。
四、预期成果
1.完成小鼠脂肪组织的凝胶酶消化，获得小鼠脂肪间充质干细胞。
2.通过形态学特征观察和免疫表型鉴定证明获得的细胞为脂肪干细胞。
3.通过成肌诱导分化实验证明获得的脂肪干细胞具有多向分化能力。
5.根据实验结果撰写科学、准确、清晰的实验报告。
五、研究计划
序号|任务名称|计划完成时间
-|-|-
1|小鼠脂肪组织消化和细胞培养准备|1周
2|细胞的复筛和检验|2周
3|流式细胞术分析|1周
4|细胞诱导分化|1周
5|结果分析、报告撰写|2周
六、研究参考文献
1.邓超,郭坤明,陈娟.小鼠脂肪间充质干细胞定向分化及其在慢性皮炎治疗中的应用[J].中国基层医药2019,26(13):23-25.
2.付华,朱晓龙,王喜碧,等.精准化小鼠脂肪干细胞鉴定的研究进展[J].生物技术通报,2020,36(1):33-37.
3.蔡利东,杨利,陈新军,等.小鼠脂肪间充质干细胞新传代培养条件的初步研究[J].国际外科学杂志,2020,32(1):114-118.
4.DonaldG.Phinney,DavidJ.Prockop.ConciseReview:Mesenchymalstem/multipotentstromalcells:thestateoftransdifferentiationandmodesoftissuerepair-currentviews.[J].StemCells,2007,25(11):2896-2902.
5.吴振峰,郝一玲.脂肪干细胞在临床应用中的质控问题研究[J].医学综述,2019,25(5):341-343.
七、研究团队
指导教师：XXX
研究人员：XXX，XXX