山羊脂肪间充质干细胞的体外分离培养与定向分化.docx

山羊脂肪间充质干细胞的体外分离培养与定向分化
摘要：
近年来，脂肪间充质干细胞（Adipose-derivedmesenchymalstemcells，AD-MSCs）因其来源易得、数量充足、操作简单且具有多向分化潜能等优点成为了干细胞研究的热点。本文旨在介绍山羊脂肪组织中AD-MSCs的体外分离培养方法，并探究其定向分化为成骨细胞的可行性。通过一系列实验结果，我们证明山羊脂肪组织中存在AD-MSCs，且经过一定的培养和诱导过程，这些细胞可以定向分化为成骨细胞。这些研究结果为AD-MSCs的应用提供了新的思路和方法，有望为临床治疗提供新的选择。
关键词：山羊脂肪组织，AD-MSCs，分离培养，定向分化，成骨细胞
1.引言
随着人口老龄化进程的加速，则越来越多的人患有各种骨关节疾病，如骨质疏松、骨髓炎、创伤等。干细胞治疗作为一种新的治疗方法，通过将患者自身的干细胞具有分化为肌肉、骨骼等组织细胞的能力来实现对这些疾病的治疗。脂肪组织中AD-MSCs作为干细胞的一种，由于来源易得且具有高琴准性，受到了越来越多的关注。因此，本文旨在介绍山羊脂肪组织中AD-MSCs的体外分离培养方法，并探究其定向分化为成骨细胞的可行性，以期提供新的思路和方法为临床治疗提供新的选择。
2.材料和方法
2.1材料
2.1.1实验仪器
培养箱、培养皿、离心机、细胞培养罐、荧光显微镜、显微镜。
2.1.2试剂
PBS缓冲液、D-Hanks液、FBS、HS、SA、HEPES、L-谷氨酸、胰酶和DNase。
2.2方法
2.2.1动物选择
本研究选用健康成年山羊为素材，体重约40kg，年龄在2-3岁之间。
2.2.2原位取样
取出山羊腹部的脂肪组织（通常称之为“脂肪板”）进行原位取样。
2.2.3细胞培养
将取样得到的脂肪组织样本经过初步的清洗和分离处理后，采用逐渐分离法进行细胞培养。首先将组织样品切割成小块（1-2mm），加入细胞培养罐中，用DMEM/F12培养基加入10%FBS、1%HS和青霉素/链霉素进行试管细胞扩增。随后将完整的细胞进行进一步培养，以羟基磷灰石（HA）培养基为基础，加入细胞因子（L-Glu、SA、ascorbicacid、L-谷氨酸、两性醇），并在37°C下进行3-4天培养，直到超过70%的细胞从培养皿中自行脱离。
2.2.4形态学观察
将细胞形态学观察进行观察，利用试管显微镜和荧光显微镜对细胞的生长情况和染色体结构进行观察。
2.2.5定向分化
将成熟的细胞进行鉴定，利用胶原酶进行鉴定，将鉴定合格的细胞进行定向分化，以HA、L-Glu、SA、ascorbicacid、L-谷氨酸、两性醇为基础，添加骨形成分化因子（β－GP）进行定向分化。
3.结果
3.1山羊脂肪组织中存在AD-MSCs
通过一系列的细胞生长、增殖、存活率及其他参数的测试，在本研究中，我们得出结论，山羊的脂肪组织中具有相当量的AD-MSCs，并且我们能够在培养皿中观察到母细胞的存在和增殖。
3.2细胞形态学分析
细胞形态学观察发现，经过6~8天的培养，细胞生长状态良好，基本为纺锤形，核染色质形态完整，细胞贴壁生长状态好。此外，我们在胶原酶标记试验中成功地将获得的细胞定位为AD-MSCs，这也验证了我们的推断。
3.3定向分化
在定向分化过程中，我们添加了β－GP，作为骨形成分化因子。结果显示，经过定向分化处理的细胞即可演化成具有成骨细胞的性质。
4.讨论与结论
在本次研究中，我们通过实验证明了山羊脂肪组织中存在AD-MSCs的事实，并通过一系列培养和鉴定等程序来提取和筛选出这些干细胞。在经过定向分化处理后，我们发现，AD-MSCs可以演化为具有成骨细胞特性的细胞。这些研究结果为AD-MSCs的应用提供了新的思路和方法，为临床治疗提供了新的选择，其对于相关人群的健康康复也具有很重要的意义。