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RNA干扰HiWi基因对肺癌干细胞增殖、凋亡的影响
RNA干扰HiWi基因对肺癌干细胞增殖、凋亡的影响
摘要：
肺癌是一种高发疾病，治疗难度较大，改善其治疗效果是当前科学研究热点之一。肺癌干细胞是肺癌治疗的重要对象，因其具有自我更新和不同分化的能力，抑制肺癌干细胞增殖和促进其凋亡是肺癌治疗的重要策略。本研究探讨了RNA干扰HiWi基因对肺癌干细胞增殖、凋亡的影响，结果表明，HiWi基因与肺癌干细胞增殖、凋亡密切相关，RNA干扰HiWi基因可明显抑制肺癌干细胞增殖和增强其凋亡，从而提供了一种重要思路和方法，为肺癌治疗提供了新的研究方向和方法。
关键词：RNA干扰；HiWi基因；肺癌干细胞；增殖；凋亡
Introduction:
肺癌是常见的恶性肿瘤，其治疗难度很大，患者的五年生存率约为15％，因此，改善其治疗效果是当前科学研究的热点之一。肺癌干细胞是肺癌治疗的重要对象，因其具有自我更新和不同分化的能力，对肺癌治疗的成功与否起着至关重要的作用。肺癌干细胞的治疗困难主要是因为它们具有抗癌治疗的能力，通过逃逸免疫监视、多药耐药等机制来抵御治疗。
HiWi蛋白是一种守护蛋白，其功能在造血和生殖细胞中发挥很大作用，它参与了RNA处理、转录和DNA复制等重要过程，也是翻译后修饰的关键因素，HiWi的过度表达已被证明与多种肿瘤的发展相关。本研究旨在探讨HiWi基因与肺癌干细胞增殖、凋亡之间的关系。
Materialsandmethods:
1.肺癌干细胞的建立
Lungcancerstemcells(LCSCs)wereestablishedfromthelungcancercelllineA549bysphere-formingassay.Briefly,single-cellsuspensionswereplatedatadensityof500cells/mlinserum-freeDMEM/F12mediumsupplementedwithB27,EGF,FGFandIGF-1.Themediumwasreplacedeverytwodaysandsphereswereallowedtoformforabouttwoweeks.
2.RNA干扰HiWi基因
LCSCsweretransfectedwithHiWisiRNAusingLipofectamine™2000.ThesiRNAsequencesusedwereasfollows:siRNA-HiWa,5’-GCCAUAACCATCGAAGUUU-3’;siRNA-HiWb,5’-GAGGUGAUCGCCUACACAA-3’;andsiRNA-HiWc,5’-GCAGUUUGAGGAAGAACUU-3’.ScrambledsiRNAwasusedascontrol.RNAinterferenceefficiencywasevaluatedbyWesternblotanalysis.
3.细胞增殖和凋亡分析
CellproliferationwasanalyzedbyMTTassay.Briefly,5000cellswereseededin96-wellplatesandincubatedfor24,48or72h.Then,20μlofMTTreagentwasaddedtoeachwellandincubatedfor4hat37°C.Themediumwasremovedand150μlofDMSOwasaddedtoeachwell.Theplateswereshakenfor10minandtheabsorbancewasmeasuredat570nmusingamicroplatereader.
CellapoptosiswasanalyzedbyTUNELassay.Briefly,cellswerefixedwith4%paraformaldehydeandpermeabilizedwith0.5%TritonX-100inphosphate-bufferedsaline(PBS).TheTUNELreactionmixturewasaddedtocellsandincubatedfor1hat37°C.CellswerecounterstainedwithDAPIandobservedunderthefluorescencemicroscope.
Results:
1.建立肺癌干细胞模型
LCSCswereestablishedfromthelungcancercelllineA549bysphere-formingassay.Underserum-freeandsuspensioncultureconditions,A549cellsgrewintonon-