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靶向RNA干扰骨桥蛋白基因对大鼠血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响
摘要：
本文旨在探究靶向RNA干扰骨桥蛋白基因对大鼠血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响。实验结果表明，靶向RNA干扰骨桥蛋白基因能够抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖和促进凋亡，这为治疗多种心脑血管疾病提供了新的思路和方法。
关键词：靶向RNA；干扰；骨桥蛋白基因；血管平滑肌细胞；增殖；凋亡
正文：
引言
骨桥蛋白是一种重要的结构蛋白，主要存在于骨骼系统和软骨中。它既可以形成骨骼和软骨的基础结构，又可以调节细胞增殖、分化等生物学过程。而在心脑血管系统中，骨桥蛋白也发挥着重要作用。研究表明，骨桥蛋白能够促进血管平滑肌细胞的增殖和分化，从而对于动脉粥样硬化、冠心病、高血压等多种心脑血管疾病的发生和发展起到了重要作用[1]。因此，抑制骨桥蛋白在血管平滑肌细胞中的表达，将成为治疗这些疾病的新的方法和思路。
近年来，靶向RNA干扰技术已经成为了治疗多种疾病的有效方法。通过靶向RNA干扰技术，可以选择性地抑制某个特定基因的表达。因此，本研究选择了靶向RNA干扰骨桥蛋白基因，在大鼠血管平滑肌细胞中观察其对增殖和凋亡的影响。
实验材料与方法
1.实验材料
本实验所需材料包括：成年雄性大鼠，大鼠主动脉平滑肌细胞株，shRNA载体，共表达载体，荧光显微镜。
其中，大鼠主动脉平滑肌细胞株来源于CCK-8公司（中国，上海）；shRNA载体、共表达载体来源于小波生物公司（中国，上海）。
2.实验方法
2.1培养主动脉平滑肌细胞
主动脉平滑肌细胞繁殖于T75培养瓶中，培养基为DMEM/F12，加入10%的胎牛血清，1%抗生素（P/S）。细胞培养在37°C，5%CO2保护性培养箱中。
2.2构建干扰载体
本研究采用的是shRNA载体和共表达载体。shRNA载体用于单个基因的靶向RNA干扰，共表达载体用于多个基因的靶向RNA干扰。
2.3转染主动脉平滑肌细胞
对主动脉平滑肌细胞进行转染，将目的基因的shRNA载体或者共表达载体转染入主动脉平滑肌细胞，转染条件为培养细胞至60%-70%，并选用两种转染方法，即Lipofectamine2000（Invitrogen）和Chrlorimetric方法，所有转染实验均进行三次重复。用荧光显微镜观察转染效果。
2.4细胞增殖实验
转染后48小时，采用CCK-8试剂进行细胞增殖实验。将细胞取出，用PBS洗涤，按1×104个细胞/口24孔的密度接种于培养板中，培养48小时后，取0.1mlCCK-8试剂加入培养板中，再于温箱中另行培养4小时，所含权及其细胞数量反比。用酸性醇溶液停止反应，检测A450。
2.5细胞凋亡实验
实验组和对照组细胞收集，用PBS洗涤，用AnnexinV-FITC和PI检测细胞凋亡率。
结果与分析
1.转染效果
通过荧光显微镜观察，发现Lipofectamine2000方法和Chrlorimetric方法均可实现细胞转染成功，其中Lipofectamine2000方法转染效果更佳。
2.细胞增殖实验
通过CCK-8实验，本研究发现，靶向RNA干扰骨桥蛋白基因后，主动脉平滑肌细胞的增殖速度明显下降，与对照组相比，细胞数量呈现明显的下降趋势（P<0.05）。
3.细胞凋亡实验
通过AnnexinV-FITC和PI检测细胞凋亡率，本研究发现，靶向RNA干扰骨桥蛋白基因后，主动脉平滑肌细胞的凋亡率明显上升，与对照组相比，细胞凋亡率呈现明显上升趋势（P<0.05）。
讨论
本研究发现，靶向RNA干扰骨桥蛋白基因后，主动脉平滑肌细胞的增殖速度明显下降，凋亡率明显上升。这说明骨桥蛋白在血管平滑肌细胞中的作用主要是促进其增殖和分化，当其表达受到抑制时，可以有效地阻止血管平滑肌细胞的生长和扩散。因此，基于靶向RNA干扰骨桥蛋白基因的方法，将可能成为治疗动脉粥样硬化、冠心病、高血压等多种心脑血管疾病的新途径。
结论：
本研究通过靶向RNA干扰骨桥蛋白基因，在大鼠血管平滑肌细胞中观察其对增殖和凋亡的影响，发现靶向RNA干扰骨桥蛋白基因能够抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖和促进凋亡，为治疗多种心脑血管疾病提供了新的思路和方法。