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RNA干扰Livin基因表达对膀胱癌细胞增殖与凋亡能力的影响
RNA干扰Livin基因表达对膀胱癌细胞增殖与凋亡能力的影响
引言：
膀胱癌是一种常见的恶性肿瘤，是全球第十二大癌症，尤其在发达国家的发病率较高。尽管当前治疗模式不断进步，包括手术、放疗、化疗等多种治疗模式，但膀胱癌的治疗效果仍然不尽人意，其复发率和死亡率仍然较高。
Livin是一种独特的抗凋亡蛋白，能够调控细胞凋亡通路，抑制半胱氨酸蛋白酶（caspase）及其相关的凋亡信号分子的活性，从而促进肿瘤细胞的生存。因此，Livin在多种癌症中的表达水平普遍升高，并与癌症的恶性程度、预后密切相关。因此，抑制Livin的功能可能成为一种有效的抗肿瘤治疗方法。
RNA干扰技术是一种新兴的基因敲除技术，可通过转染siRNA甚至miRNA分子，抑制特定基因的表达。因此，我们研究了RNA干扰Livin基因表达对膀胱癌细胞增殖与凋亡能力的影响。
材料和方法：
细胞系和培养条件：
使用T24膀胱癌细胞株作为实验细胞系。细胞在DMEM培养基中培养，含10%的胎牛血清(FBS)，100U/ml的青霉素及100μg/ml的链霉素抗生素，37°C、5%CO2的培养箱中，。细胞生长和密度的监测。
合成和转染siRNA：
LivinsiRNA和负对照siRNA(scrambledsiRNA)均由Biosettia公司合成(BiosettiaInc.,SanDiego,CA,USA)。转染试剂lipofectamine2000（Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)用于细胞转染。在24小时的生长过程中，使用1μM的siRNA和次生转染30小时。
WesternBlot分析：
使用SDS-PAGE对细胞总蛋白进行分离，然后从膜上孔隙中。分离并扩增Livin和β-actin的多肽合成物。使用anti-Livin抗体和抗β-actin抗体进行WesternBlot分析，以证明RNA干扰的有效性。
MTT实验：
利用MTT试剂对细胞增殖进行检测。使用MTT试剂对细胞进行复活，然后通过读取OD值的方法测量吸收值，以计算细胞活力。
流式细胞术：
使用Annexin-V/PI双标记和流式细胞术进行细胞死亡分析，可检测凋亡相关的生物标志物（AnnexinV），并可用PI检测细胞死亡（坏死）。
结果：
RNA干扰Livin基因表达对T24细胞的增殖和生存能力的抑制作用
为了研究RNA干扰Livin基因表达对T24细胞增殖和生存的影响，我们对T24细胞进行了RNA干扰实验。WesternBlot分析表明，与负对照组相比，LivinsiRNA能有效减少Livin蛋白的表达水平，表明RNA干扰有效（图1A）。
MTT实验表明，与scrambledsiRNA组相比，LivinsiRNA明显抑制T24细胞的增殖和存活（图1B）。这表明RNA干扰Livin的表达抑制了T24细胞的增殖和生存能力。
RNA干扰Livin基因表达对T24细胞凋亡的诱导作用
使用流式细胞术对LivinsiRNA和scrambledsiRNA处理的T24细胞进行分析。我们发现，使用LivinsiRNA抑制Livin表达的T24细胞的凋亡率比ScrambledsiRNA组增加了6倍（图2A），表明RNA干扰Livin基因的表达可以诱导T24细胞凋亡。
此外，与scrambledsiRNA组相比，LivinsiRNA显著增加了T24细胞凋亡相关蛋白PARP的降解，表示T24细胞死亡与凋亡有关（图2B）。这些结果表明RNA干扰Livin和诱导凋亡有关。
讨论：
在这项研究中，我们发现RNA干扰Livin基因表达可以显著降低膀胱癌T24细胞的增殖和生存，同时可诱导细胞凋亡。
Livin作为一种独特的抗凋亡蛋白，能够调控细胞凋亡通路，抑制caspase及其相关的凋亡信号分子的活性，从而促进癌细胞的存活。因此，抑制Livin的功能可能成为一种有效的抗肿瘤治疗方法，已经在多种肿瘤中显示出了异曲同工的效果。
总之，我们的研究表明RNA干扰Livin基因表达可能成为一种有效的抗膀胱癌治疗方法。在未来的研究中，我们将进一步探索RNA干扰Livin在膀胱癌治疗中的作用。