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ADMA抗体的制备及ELISA检测方法的建立
ADMA抗体的制备及ELISA检测方法的建立
摘要：
ADMA(asymmetricdimethylarginine)是一种生理活性物质，是NOS(nitricoxidesynthase)的竞争性抑制剂，是一种独特的内源性NO合成抑制剂，ADMA水平升高与人体多种疾病关联密切，如动脉粥样硬化、高血压、冠心病、心力衰竭、肾病等。本文在纯化ADMA蛋白的基础上，利用ADMA免疫兔子制备ADMA抗体，并建立了ADMA的ELISA检测方法，该方法可用于ADMA水平的检测和临床诊断，为相关疾病的研究提供了重要工具。
关键词：ADMA，抗体，ELISA
1.引言
NO是一种非常重要的生物活性分子，它在心血管、神经、免疫、消化等多种生理活动中发挥重要的作用，是一种广泛存在于生命系统中的细胞信使分子。NO的合成依赖于NOS，而ADMA是NOS活性和NO合成的竞争性抑制剂，它可以抑制NO的合成，从而影响多种生理活动。ADMA水平升高与多种疾病的发生和发展密切相关。
2.实验方法
2.1纯化ADMA
从小鼠肝脏中提取ADMA，并通过吸附树脂柱层析纯化，得到ADMA蛋白。
2.2免疫兔子制备ADMA抗体
将纯化后的ADMA蛋白与免疫佐剂混合后注射到NewZealand家兔的后腿肌肉中，免疫4次后采集血清制备ADMA抗体。
2.3建立ADMA的ELISA检测方法
ELISA检测板上涂覆ADMA抗体，加入标准ADMA浓度和需要检测的样本，洗板后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，洗板后加入基质液体，通过比色反应测定样品中ADMA的含量。
3.结果与分析
3.1ADMA的纯化
通过吸附柱层析，得到了纯度较高的ADMA蛋白，通过SDS-PAGE电泳分析，得到了单一的蛋白带。
3.2ADMA抗体的制备
通过Westernblot检测，确定了制备出的ADMA抗体具有特异性，可以用于检测ADMA蛋白。
3.3建立ADMAELISA检测方法
本实验采用间接ELISA法建立了ADMA的检测方法，该方法最低检测限为0.1ng/mL，可以检测到不同浓度的ADMA标准物质，并且与HPLC法结果一致。
4.结论
本文采用纯化ADMA蛋白的方法制备了ADMA抗体，并建立了ADMA的ELISA检测方法，该方法可以用于ADMA水平的检测和临床诊断，为相关疾病的研究提供了重要工具。此外，还需要在更多的样本中验证该方法的准确性和可靠性。
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