酵母扩培工艺.doc

酵母扩大培养工艺
1、目的
规范酵母扩培作业程序，有效控制扩培工艺参数，保证培养酵母质量均一、稳定。
2.适用范围
适用于实验室、酿造车间现场扩培和锥罐扩培工序。
3.职责
由公司技术处负责编制、修改，实验室和酿造车间负责实施。
4.规定内容
4.1实验室培养
4.1.1培养基制备流程
4.1.1.1取12度生产定型(热或冷)麦汁,调整pH至5.3-5.5,进行稀释，稀释比例以最终煮沸浓度控制在12度为准。
4.1.1.2稀释后麦汁冷却(或加热)至40℃按每升2个蛋清搅至起泡后打入。升温至60℃保温30分钟，保温结束后升温至100℃煮沸30分钟。
4.1.1.3检测调整浓度后过滤、分装入试管、小三角瓶、大三角瓶，0.07Mpa灭菌30分
钟。
4.1.1.4灭菌后培养基要贴有制备日期标签，空培(室温放置)3天以上确认无菌后方可使用。
4.1.1.5卡氏罐培养基制备采用过滤后热麦汁装入清洗并经0．10Mpa蒸汽杀菌1小时后的卡氏罐中0．10Mpa灭菌30分钟，提前1-2天完成，确保接种温度稳定。当天能够迅速冷却的，则取当天麦汁处理，冷却后接种。
4.1.2无菌室卫生操作流程
4.1.2.1每天对室内进行30分钟紫外杀菌。超净台用前提前打开风机及自带的紫外灯灭菌30分钟。
4.1.2.2无菌操作前对无菌室进行全面彻底清洁。地面、墙壁、天棚及空间采用甲醛熏蒸或75%酒精擦试。同时用紫外杀菌30分钟。
4.1.2.3卡氏罐接种，超净台无法操作时，室内空间当天再次进行上述空间杀菌。
4.1.2.4无菌室内应避免其他物品的摆放，尤其操净台面。以免破坏空气层流。
4.1.2.5每次扩培时应对无菌室内空间及超净台进行两次空气捕捉检测。斜面接出及卡氏罐接种时各进行一次。
4.1.3实验室阶段扩培工艺流程
1.安培管(或斜面菌种)在无菌条件下,接入装10ml麦汁培养液的18×180mm试管中，在25℃培养箱中活化培养24小时(如从安培管转接,需再活化一次).
2.将活化后的试管培养液摇均,在无菌条件下,分别接1ml入装10ml麦汁培养液的
18×180mm试管中，在25℃培养箱中培养活化24小时.
3.将试管中的10ml酵母培养液转接到装50ml麦汁培养液的150ml三角瓶中,在22℃培养箱中培养24小时.
4.将三角瓶中的50ml酵母培养液转接到装500ml麦汁培养液的1000ml三角瓶中,在19℃培养箱中培养24小时.
5.将三角瓶中的500ml酵母培养液转接到装3000ml麦汁培养液的5000ml三角瓶中,在19℃培养箱中培养24小时.
6.将三角瓶中的3000ml酵母培养液转接到装25L麦汁培养液的卡氏罐,在13℃培养箱中培养24小时～48小时.
7.将卡氏罐中的酵母培养液转接到装300L麦汁培养液的汉生罐(种子罐),在13℃条件下培养24小时～48小时.
4.1.3.1斜面菌种挑取应在距离斜面顶部1/3处边缘部位轻挑一菌耳。液体管之间的活化过程采取用无菌吸管吸取0.5ml注入10ml液体管内，其他接种方式为全部到入(对瓶口粘培养液的用火烤干再塞盖)。
4.1.3.2对采用软管连接进行接种时，乳胶管能够进行拉刷刷洗时进行拉刷清洗，用前连同罐一同蒸汽杀菌或采取105℃干热灭菌30分钟后放无菌室备用，为防止胶管老化，定期更换。不能采取拉刷刷洗时，水冲洗后用75%酒精进行浸泡备用。连接管路进行蒸汽杀菌。
4.2现场培养
4.2.1CIP刷洗程序
4.2.1.1罐体碱刷洗：清水冲洗(其中包括能走碱水部分)无沫后,采用片碱熔化后配成2~3%、不低于70℃碱液循环清洗罐体30分钟.
4.2.1.2清水冲洗：清水冲洗20分钟(走碱部分),最后以PH试纸中性为准。
4.2.1.3酸洗：清水冲洗后,用1.0-1.5%的磷酸循环刷洗一次，方法同碱液刷洗。
4.2.1.4清水冲洗：清水冲洗20分钟(走酸部分),最后以PH试纸中性为准。
注：以上清洗以无酸、碱残留为准(最终以PH试纸中性为准)。
4.2.1.4扩培锥罐执行车间锥罐CIP刷洗工艺。
4.2.2蒸汽杀菌
4.2.2.1罐体及管路、风过滤器包蒸汽杀菌
罐体及管路采用105~110℃杀菌30分钟，其中包括冲氧管、备压管杀菌、风过滤器包杀菌，杀菌结束后保压备用并用无菌风将风过滤器包吹干。罐体杀菌时排气阀、取样阀及管盘接口排放蒸汽保证杀菌20分钟。麦汁、倒酒管路采用105~110℃杀菌20分钟。
4.2.2.2麦汁杀菌
汉生罐、扩大罐麦汁采用热麦汁，升温至100℃保温30分钟，保温结束后保压降温至接种温度，接种前通风搅拌2分钟,锥罐采用大生产冷麦汁。
4.2.3扩培工艺流程（暂行）
卡氏罐（25L）→汉生罐（0.3KL15.0℃）———→扩大罐（3KL13.0℃）
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汉生罐（0.3KL15.0℃）
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