实时荧光定量PCR技术的原理及应用.pptx

实时荧光定量PCR技术(jìshù)的原理及应用提纲(tígāng)：􀂇实时荧光定量(dìngliàng)PCR定义：与普通(pǔtōng)PCR的区别///荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以(kěyǐ)设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，一般荧光域值的设置是基线（背景）荧光信号的标准偏差的10倍。

每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数被称为CT值（thresholdvalue）。定量(dìngliàng)PCR的数学原理斜率(xiélǜ)与扩增效率荧光(yíngguāng)定量PCR化学原理1、SYBRGreen法SYBRGreen熔解曲线(qūxiàn)分析SYBRGreen法优缺点2、TaqMan探针(tànzhēn)法TaqMan作用(zuòyòng)机理TaqMan法优缺点

Real-timePCR方法(fāngfǎ)应用
•绝对定量(AbsoluteQuantification，AQ)
病原体检测(jiǎncè)
转基因食品检测(jiǎncè)
基因表达研究
•相对定量(RelativeQuantification，RQ)
基因在不同组织中的表达差异
药物疗效考核
耐药性研究
绝对(juéduì)定量与相对定量的定义绝对定量(dìngliàng)通过标准品定量(dìngliàng)绝对定量(dìngliàng)：从荧光到拷贝数相对定量(dìngliàng)通过内标定量(dìngliàng)相对定量(dìngliàng)：参照因子Calibrator相对(xiāngduì)定量分析方法1-ΔΔCt相对定量分析方法(fāngfǎ)2：双标准曲线法目标基因与内参基因扩增效率不同样品(yàngpǐn)标准(biāozhǔn)品标准(biāozhǔn)品梯度稀释方法
复管测试

●样品和标准品都要重复(chóngfù)
●重复(chóngfù)次数须遵循统计学要求
平台(píngtái)PCR仪介绍Rotorgene6500HRMMJOpticon2

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