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诱导IPEC--J2细胞自噬的猪流行性腹泻病毒非结构蛋白筛选的开题报告
1.研究背景
猪流行性腹泻病毒（Porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV）是一种单股正链RNA病毒，属于冠状病毒科。该病毒主要感染猪，引起猪的急性腹泻。自2010年在中国再次出现后，已经成为全球猪业的头号威胁之一。
自噬是一种由溶酶体介导的细胞自我分解过程。在细胞内，通过形成“自噬体”，分解并回收细胞中无用或损坏的蛋白质、细胞器等，维持细胞的正常代谢和功能。近年来，研究表明，细胞自噬参与了病毒感染的调控过程。而PEDV的病毒感染过程中，细胞自噬途径的作用尚未完全明确。
因此，本研究拟采用筛选PEDV感染后诱导宿主细胞自噬的病毒非结构蛋白的方式，探究PEDV感染过程中细胞自噬的分子机制，为进一步研究PEDV的病理生理及疫苗研发提供理论基础。
2.研究目的
本研究的目的是通过多种方法筛选出PEDV感染后诱导IPEC-J2细胞自噬的病毒非结构蛋白，进一步阐明PEDV感染过程中细胞自噬的分子机制，为PEDV的病理生理及疫苗研发提供理论基础。
3.研究内容及方法
（1）细胞系
IPEC-J2细胞是一种源自小肠上皮细胞的猪肠上皮细胞系，在PEDV感染研究中被广泛使用。
（2）病毒感染
将PEDV与IPEC-J2细胞进行感染，并通过Westernblot方法检测细胞自噬标志物LC3B、p62的表达情况，以判断PEDV感染是否诱导细胞自噬。
（3）病毒非结构蛋白筛选
采用高通量小分子筛选技术，筛选出PEDV感染后显著诱导细胞自噬的病毒非结构蛋白，包括nsp1、nsp2、nsp3、nsp4、nsp6、nsp7、nsp10、nsp11、nsp12等。
（4）细胞自噬信号通路相关分子检测
通过Westernblot方法检测与细胞自噬信号通路相关分子（如Beclin1、p-AKT、p-mTOR等）的表达情况，阐明PEDV感染过程中细胞自噬的分子机制。
4.研究意义及预期结果
本研究将有助于深入了解PEDV感染过程中细胞自噬的分子机制，为研究PEDV的病理生理及疫苗研发提供理论基础。预期得到以下结果：
（1）证明PEDV感染可以诱导IPEC-J2细胞自噬。
（2）筛选出PEDV感染后诱导IPEC-J2细胞自噬的病毒非结构蛋白，包括nsp1、nsp2、nsp3、nsp4、nsp6、nsp7、nsp10、nsp11、nsp12等。
（3）揭示PEDV感染过程中细胞自噬的分子机制，为PEDV的病理生理及疫苗研发提供理论基础。
5.研究计划及时间安排
本研究计划为期2年，主要步骤及时间安排如下：
第1年：完成IPEC-J2细胞株的培养和PEDV感染实验，通过Westernblot方法检测细胞自噬标志物LC3B、p62的表达情况。
第2年：筛选出PEDV感染后诱导IPEC-J2细胞自噬的病毒非结构蛋白，并通过Westernblot方法检测与细胞自噬信号通路相关分子的表达情况。
6.结论及展望
本研究将有助于深入了解PEDV感染过程中细胞自噬的分子机制，为研究PEDV的病理生理及疫苗研发提供理论基础。展望未来，将进一步研究与PEDV感染相关的细胞自噬信号通路，并探究针对PEDV感染的治疗方法。