核酸印迹与分子杂交学习教案.pptx

会计学核酸分子杂交
（nucleotidemolecularhybridization）

以DNA的变性、复性为理论基础；

指具有一定同源序列(xùliè)的两条核酸单链（DNA或RNA），在一定条件下按碱基互补配对原则经过复性处理后，形成异源双链的过程。Southern印迹(yìnjì)（Southernblot）Southernblot基本(jīběn)流程Southernblot关键步骤
待测DNA样品的酶切消化
基因组DNA进行消化，才能在电泳过程
中将不同长短的DNA片段分离开。

基因探针的标记
探针序列(xùliè)和探针信号的选择。要考虑
特定基因的重复性、保守性和稳定性。
可用同位素和非同位素标记。
Northern印迹(yìnjì)（Northernblot）
Westernblot（蛋白免疫印迹）技术

是将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶中转印
到化学合成膜的支撑物上，利用特异性抗体
进行反应，定性分析蛋白质。

用于分析基因(jīyīn)表达(蛋白水平）的变化。原位分子(fēnzǐ)杂交技术/聚合酶链式反应(liànshìfǎnyìng)聚合酶链式反应
（polymerasechainreaction,PCR）

是一种在体外特异地扩增已知基因的方法；
由K.Mullis于1983年建立；1999年获诺贝尔化学奖。
可用于分析基因及其产物的水平变化；
可进行(jìnxíng)实时、定量分析；/16RT-PCR与PCR区别

模板(múbǎn)为mRNA
需逆转录酶
产物为cDNA18实时、定量(dìngliàng)PCR技术20DNA序列(xùliè)测定DNA序列(xùliè)分析方法戊糖DNA的序列(xùliè)测定25/DNA自动测序DNA序列(xùliè)自动分析DNA自动测序结果(jiēguǒ)举例DNA序列(xùliè)分析可以揭示基因和基因组一级结构变化DNA芯片(xīnpiàn)技术DNA芯片（DNAchip）
也称DNA微阵列(DNAmicroarray)
在固相支持物上有序固化寡核苷酸或DNA探针，与待测荧光标记(biāojì)样品进行杂交；
通过对杂交信号的检测、比较和分析，得出样品的遗传信息；
包括cDNA芯片和寡核苷酸微阵列基因芯片工作(gōngzuò)流程DNA芯片(xīnpiàn)技术DNA芯片技术的特点
快速、高效、敏感、平行(píngxíng)化、自动化。
通过芯片技术筛选得到的表达信息还要用Northernblot或定量RT-PCR进行验证
DNA芯片技术的应用
肿瘤基因表达谱的差异研究；
基因多态性分析；
微生物筛选鉴定；
遗传病产前诊断等
蛋白质芯片(xīnpiàn)和组织芯片(xīnpiàn)
蛋白质芯片技术优势
在蛋白质结构、功能和相互作用，以及
疾病发展过程中蛋白表达谱差异研究等方
面。
在临床医学研究中，利用(lìyòng)蛋白质芯片技
术寻找新的肿瘤标记物，各种肿瘤标记物
的筛选，用于早期诊断和治疗效果的监测。组织芯片(xīnpiàn)

将组织标本集成在一张固相载体上形成微缩组织切片，在组织切片上高通量获取基因的表达信息。

应用：肿瘤病理学（病因、诊断、肿瘤标记物筛选、治疗等）感谢您的观看(guānkàn)。