核酸分子杂交.pptx
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核酸分子杂交23456789101112131415161718192021222324252627282930313233343536373839404142434445464748495051525354555657585960616263646566676869707172737475767778798081
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获得、检测和筛选目的基因的主要方法之一核酸分子杂交:(nucleicacidmolecularhybridization)检测对象:克隆化的基因组DNA,、细胞总DNA、总RNA。杂交方法不同,被检测的核酸可以是提纯的,也可以在细胞内杂交,即细胞原位杂交。Content第一节核酸分子杂交的基本原理如把一段已知基因(DNA或RNA)核酸序列用合适标记物(如放射性同位素、生物素等)予以标记,当作探针(probe),与变性后的单链基因组DNA或RNA进行杂交。再用合适方法(如放射自显影或免疫组织化学等技术)把标
核酸分子杂交的的用途.pptx
第七章核酸的分子杂交一、核酸分子杂交的概念核酸分子杂交(nucleicacidhybridization)是指具有互补序列的两条核酸单链在一定条件下按碱基配对原则形成双链的过程。杂交的双方分别称为探针与待测核酸,杂交后形成的异源双链分子称为杂交分子。DNA—DNA杂交分子核酸分子杂交技术是目前生命科学研究领域中应用最广泛的技术之一。用途:1、是定性或定量检测特异DNA或RNA序列片段的有力工具;2、在基因工程技术中,用放射性标记或非放射性标记的寡核苷酸或cDNA探针进行菌落杂交,可从cDNA文库或基因组文
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第三节核酸分子杂交技术1.探针概念:在化学及生物学意义上探针(Probe),是指能与特定靶分子发生特异性相互作用分子,并可被特殊方法所探知核酸分子探针则是指带有标识物,能与互补核酸序列退火杂交特定已知核酸片段。探针设计和选择影响核酸杂交试验结果高度特异性、正确性。2.探针种类、选择及特点设计寡核苷酸探针遵照标准:①探针长度:普通要求10~50bP。过短则特异性降低,过长,则合成困难、杂交时间延长,亦会出现非特异性杂交②G:C碱基对含量应占40~60%;过少,则不易杂交,或杂交双链不稳定;过多,则会产生非特
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核酸分子杂交技术:具一定同源性的两条(DNA或RNA)单链在适宜的温度及离子强度等条件下,可按碱基互补配对原则特异性地复性,形成双链主要内容核酸分子杂交技术:1968年华盛顿卡内基学院(CarnegieInstituteofWashington)的RoyBritten及其同事发明的变性一、DNA变性与复性2、变性的方法:1)热变性:温度升高到90~100℃时,双链核酸分子链间的氢键完全断裂。2)酸碱变性:pH值低于3或高于10时,双链核酸分子链间的氢键断裂。3)化学试剂变性:如尿素、甲酰胺、甲醛等使双链核