滩羊β-防御素基因表达及活性检测的任务书.docx

滩羊β-防御素基因表达及活性检测的任务书
任务书
题目：滩羊β-防御素基因表达及活性检测
任务目的：
1.通过实验方法检测滩羊β-防御素基因的表达情况。
2.利用荧光素酶报告基因技术检测滩羊β-防御素基因的活性。
任务要求：
1.阅读相关文献，了解滩羊β-防御素基因的结构和功能。
2.选取一定数量的滩羊来收集血样，提取总RNA并检查RNA质量。
3.设计反转录-PCR实验建立滩羊β-防御素基因表达模型。
4.利用荧光素酶报告基因技术检测滩羊β-防御素基因的活性。
5.进行实验数据统计和分析，撰写实验报告。
任务步骤：
1.收集样品。选取一定数量的滩羊，从其短毛部位采集血样，提取总RNA并检查RNA质量。
2.设计反转录-PCR实验。根据文献中已有的反转录-PCR方案，适当加以修改和完善，确定反转录-PCR实验所需的试剂和盐溶液浓度以及PCR反应体系。
3.进行反转录-PCR实验。将反转录反应液与RNA混合，通过PCR扩增特定的基因。将扩增后产生的PCR产物通过凝胶电泳平台检测，确定β-防御素基因是否被扩增。
4.选取合适的质粒并克隆到荧光素酶报告基因上。将β-防御素反向植入到荧光素酶报告基因上，使得荧光素酶活性与β-防御素基因的表达水平相一致。将质粒转化至适合的细胞中。
5.设计荧光素酶实验。根据文献中已有的荧光素酶实验方案，适当加以修改和完善，确定荧光素酶实验所需的试剂和盐溶液浓度以及PCR反应体系。
6.进行荧光素酶实验。通过检测样品中的分子荧光素酶活性，确定β-防御素基因的活性。
7.进行实验数据的处理和分析。将实验得到的数据进行统计和分析，并通过有效的图表，将实验过程和结果表现出来，撰写完整的实验报告。
时间安排：
本任务预计用时为两个月。具体时间安排如下：
第一周：阅读相关文献，熟悉基因表达和荧光素酶实验技术。
第二周：收集样品，提取RNA并检查RNA质量。
第三周：设计反转录-PCR实验。
第四周：进行反转录-PCR实验并检测扩增产物。
第五周：选择荧光素酶报告基因并克隆β-防御素基因。
第六周：设计荧光素酶实验。
第七周：进行荧光素酶实验。
第八周：数据处理和实验报告编写。
任务参考文献：
1.程志龙等.滩羊β防御素基因的克隆及分析.唐山师范学院学报.2006,28(5):14-16.
2.赵世娜等.小鼠荧光素酶报告基因在基因表达和药物筛选中的应用.医学细胞生物学.2008,23(3):266-269.
3.蒋志明等.反转录-PCR技术在基因表达分析中的应用.山东卫生职业学院学报.2010,24(2):68-71.
附录1基因结构图
[Image:image.png]
附录2实验检测流程
[Image:image.png]