人α防御素融合表达、纯化及生物活性检测.docx
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人α防御素的稳定表达和活性鉴定【摘要】目的:制备有较高生物学活性的分泌型人α防御素1与α防御素3,并初步鉴定其抗菌活性;方法:将真核表达质粒pcDNA31/V5HisTOPOHNP1,3与含有dhfr基因的质粒pDCH1P11共转染入CHOdhfr,ELISA检测到培养上清中重组蛋白的表达,对阳性表达的细胞进行G418筛选,对其中9个表达量较高的阳性克隆进行氨甲喋呤加压扩增,ELISA法、RTPCR法及间接免疫荧光分析蛋白表达情况,并同步测定其体外抗菌活性.结果:α防御素1的表达量是1885~4746mg