猪圆环病毒2型的分离鉴定、实时荧光定量PCR方法的建立及应用的任务书.docx

猪圆环病毒2型的分离鉴定、实时荧光定量PCR方法的建立及应用的任务书
任务书
任务名称：猪圆环病毒2型的分离鉴定、实时荧光定量PCR方法的建立及应用
任务背景：
近年来，猪圆环病毒2型（PorcineCircovirus2，PCV2）引起了广泛的关注，该病毒主要感染猪只，可导致严重的疾病症状，如猪隐球菌病、多系统萎缩症等，对猪养殖业造成了巨大的经济损失。因此，建立高效的检测方法对于猪圆环病毒2型的防控具有重要意义。
任务目的：
建立一种高效、准确的猪圆环病毒2型的分离鉴定、实时荧光定量PCR方法，并应用于肉猪的检测。
任务内容：
1.采集疑似猪圆环病毒2型感染的肉猪样本，并进行病毒分离
2.使用特异性引物扩增病毒基因片段，进行病毒的PCR鉴定
3.构建病毒质粒，用于标准曲线的制备
4.建立实时荧光定量PCR方法，对病毒进行定量检测，并优化反应体系
5.对建立的实时荧光定量PCR方法进行验证，并与其他检测方法进行比对
6.对肉猪样本进行实时荧光定量PCR检测，分析其感染情况
7.撰写相关检测方法的技术流程和实验数据的分析报告
任务计划：
任务开始时间：2021年5月1日
任务完成时间：2022年4月30日
任务阶段：
第一阶段（5月1日-8月31日）：
1.采集样品，进行病毒分离，获取猪圆环病毒2型分离物，并进行PCR鉴定
2.质粒构建，标准曲线的制备
第二阶段（9月1日-12月31日）：
1.建立实时荧光定量PCR方法，并进行反应体系的优化
2.对建立的方法进行验证，并与其他检测方法进行比对
第三阶段（1月1日-4月30日）：
1.对肉猪样本进行实时荧光定量PCR检测，分析其感染情况
2.撰写相关检测方法的技术流程和实验数据的分析报告
任务预算：
任务预算共计：50万元，其中包括：
设备购置费用：20万元
材料费用：10万元
人工费用：20万元
任务验收标准：
1.分离得到的猪圆环病毒2型分离物经PCR检测均为阳性
2.建立的实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强、重复性好，并能与其他检测方法进行比对
3.对肉猪样本进行实时荧光定量PCR检测，可准确分析其感染情况
4.撰写相关检测方法的技术流程和实验数据的分析报告能够达到国际上的通行标准
任务执行人：
负责人：XXX
成员：XXX、XXX、XXX
任务执行单位：
XXX大学
参考文献：
1.Guo,L.,Fu,Y.,Wang,Y.,Lu,Y.,Zhang,J.,Huangfu,Y.,...Hua,X.(2016).DevelopmentofTaqman-basedreal-timePCRassaysfordetectingporcinecircovirustype2inpigsera.JournalofVirologicalMethods,236,103-108.
2.Huang,Q.,Liu,W.,Liu,C.,Zhang,Y.,&Guo,L.(2014).Establishmentofaduplexreal-timePCRmethodfordetectionofPorcinecircovirustype2andMycoplasmahyopneumoniae.JournalofVirologicalMethods,207,55-59.
3.Liu,L.,Cheng,Y.H.,Poropatich,K.O.,Zhou,L.,Jiang,Y.H.,Yang,W.J.,&Zhang,Y.Z.(2016).EstablishmentoffluorogenicquantitativePCRfordetectionofporcinecircovirustype2.JournalofZhejiangUniversity.Science.B,17(1),50-56.