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人SUMO-3基因原核表达载体的构建、多克隆抗体的制备的综述报告
人SUMO-3基因原核表达载体的构建、多克隆抗体的制备的综述
概述：
Smallubiquitin-likemodifier-3(SUMO-3)是一种蛋白质修饰的信号分子，它参与许多生物学过程，例如蛋白质定位，转录调控，DNA损伤修复等。因此，构建SUMO-3的表达载体并制备多克隆抗体对其研究具有重要意义。本文将重点介绍人SUMO-3基因原核表达载体的构建以及多克隆抗体的制备过程。
1.构建人SUMO-3基因原核表达载体
（1）从cDNA模板中扩增SUMO-3基因
人SUMO-3基因的编码区域约为354bp。可以从人cDNA库（例如HEK293的cDNA库）中扩增SUMO-3基因。PCR扩增条件为94℃预变性5min，95℃变性30s，62℃退火30s，72℃延伸45s，30个循环。
（2）克隆SUMO-3基因到原核表达载体
扩增获得SUMO-3基因后，可以将其克隆到适当的原核表达载体（如pET-28a）中。使用限制酶切位点如NdeI和XhoI以便方便地插入和克隆SUMO-3基因，同时保留载体中的His-Tag序列，以方便纯化SUMO-3融合蛋白。
2.制备多克隆抗体
（1）制备SUMO-3重组蛋白
为制备多克隆抗体，需要纯化SUMO-3融合蛋白。首先，将含有SUMO-3融合蛋白的大肠杆菌重悬液离心去除菌体，然后用鸟嘌呤硫酸盐（Ni2+-NTA）亲和层析柱纯化。步骤包括用洗脱缓冲剂洗脱交联蛋白，并在清洗缓冲液中洗脱SUMO-3融合蛋白。
（2）制备免疫原
为制备多克隆抗体，还需要制备SUMO-3免疫原。将纯化的SUMO-3融合蛋白加入沸水中使其变性，并快速冷却至0℃。将免疫原在多肽载体KLH或BSA上偶联，并在氯化钠/磷酸缓冲液中进行洗脱。
（3）制备抗体
为制备多克隆抗体，需要注射免疫原到合适的动物中(如兔子）并收集血清。免疫程序可以在4～6个星期后进行。然后，离心血清收集血清，并使用Sumo-3融合蛋白来鉴定含有SUMO-3抗体的血清。
总结：
本文介绍了人SUMO-3基因的原核表达载体的构建以及多克隆抗体的制备过程。它是探究人SUMO-3蛋白的功能和生物学特性非常有用的工具。