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人泛素基因原核表达载体的构建、表达及鉴定的中期报告
本项目旨在构建一种人泛素基因原核表达载体，通过表达和纯化获得大量纯度高的人泛素蛋白，并进行活性鉴定和结构表征，为进一步研究泛素通路提供有力的实验材料。
目前，我们已经完成了以下工作：
1.选择了合适的载体和真核表达元件：根据文献报道和实验条件，我们选择了pET-28a向量作为载体，并结合T7启动子和His标签作为真核表达元件。同时，对于蛋白质的可溶性和纯度有重要影响的有丝氨酸和丙氨酸等残基位置也进行了优化。
2.合成了人泛素基因：我们通过基因合成技术，将人泛素基因序列根据原核表达所需进行了优化，并合成了DNA序列以进一步进行克隆。
3.克隆构建及鉴定：我们将合成的人泛素基因序列克隆至pET-28a载体中，并通过PCR、限制酶切和测序等方法对克隆产物进行了鉴定和确认，确保目标基因在载体中的正确性和完整性。
目前正在进行的工作有：
1.原核表达：我们已经在大肠杆菌中成功表达了人泛素蛋白，并通过SDS-PAGE和Westernblot等技术对表达产物进行了初步鉴定。下一步将对表达条件进行优化，以提高目标蛋白的产量和纯度。
2.蛋白纯化：我们计划采用His标签亲和纯化和离子交换色谱等方法对表达的泛素蛋白进行纯化，以获取高纯度的泛素样品，方便后续的活性鉴定和结构表征。
总的来说，我们已经初步完成了人泛素基因原核表达载体的构建和表达，接下来将重点进行目标蛋白的纯化和活性分析，为后续的研究提供扎实的实验基础。