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抗栓形成的融合蛋白在毕赤酵母中表达研究的中期报告
背景
栓塞是一种常见的疾病，它发生的主要原因是血液中的血栓。慢性心血管疾病、动脉粥样硬化和静脉曲张等病症引起的血栓是容易形成栓塞的主要原因。为了预防这种情况的发生，需要开发有效的抗栓剂。目前，市场上使用的常规抗栓剂几乎都存在严重的副作用和食品相互作用的问题，因此开发更安全有效的抗栓剂变得尤为重要。
研究方法
针对以上问题，我们尝试使用基因工程技术合成了一种融合蛋白，该蛋白由血小板激酶抑制剂pirfenidone和血小板膜GPIIb-IIIa抗原的特异性配体（RGD）组成，并命名为PIR-RGD。
我们使用伯氏酵母作为表达宿主，将PIR-RGD基因克隆到表达载体pPICZαA，随后将其转化到毕赤酵母中。使用跨膜半乳糖转运酶（ScGAL7）启动子（promoter）和α积累区（leadersequence），以及丝氨酸蛋白酶割位（Kex2p）和磷脂酰肌醇酰转移酶割位（Sps4p）等表达元素，促进PIR-RGD在毕赤酵母的表达和分泌。
结果
我们完整合成了PIR-RGD基因，并将其成功克隆到pPICZαA载体中。利用限制酶分析、DNA测序以及植入的阴性对照确定了基因的正确性和完善性。
进一步，我们将重组质粒转导到毕赤酵母中，用ZeoR选择出带有目标基因的阳性克隆，利用Westernblot技术检测表达的PIR-RGD是否正确。我们的结果表明，PIR-RGD能够在毕赤酵母中表达，且有明显的酶切加工和分泌。
结论
在这项实验中，我们成功地将PIR-RGD基因克隆到毕赤酵母中，并表达了功能性的融合蛋白。这为我们的研究提供了坚实的基础，我们将进一步研究该融合蛋白的抗栓功效和相应的作用机制。