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DNMT1基因shRNA慢病毒稳定转染KYSE150细胞株的建立及鉴定的中期报告
本研究旨在建立KYSE150细胞株中DNMT1基因稳定沉默的模型，以探究DNMT1基因在食管癌细胞中的功能和机制。本文针对实验的中期进展，进行简要的报告。
1.实验设计
本研究设计了两个实验组：稳转组和空转组。分别使用含有shRNA-DNMT1或空载体的慢病毒颗粒对KYSE150细胞株进行转染，以稳定沉默DNMT1基因。通过Westernblot和qPCR等方法检测转染效果。
2.实验进展
2.1慢病毒颗粒的包装和转染
使用pLKO.1-shRNA-DNMT1和pLKO.1空载体作为模板，分别进行慢病毒颗粒的包装。经验证，均能够成功包装。
接着，将包装好的慢病毒颗粒分别用于KYSE150细胞的转染，以建立稳转组和空转组。
2.2qPCR和Westernblot的检测
使用qPCR方法检测稳转组和空转组中DNMT1的表达水平。结果表明，与空转组相比，稳转组中DNMT1的表达降低了约80%。这表明，慢病毒颗粒成功地沉默了DNMT1基因。
另外，使用Westernblot方法检测了DNMT1蛋白的表达。结果表明，稳转组中DNMT1蛋白的表达降低了约85%，与qPCR的结果相当一致。
3.下一步工作计划
下一步，我们将进行详细的功能和机制研究。首先，我们将考察DNMT1基因对KYSE150细胞增殖、凋亡和迁移的影响。鉴于DNMT1基因的重要性，我们也将探究其调节食管癌细胞基因表达的机制。