不同菌株果糖基转移酶的活性鉴定与分析.pdf

农业基础科学叶现代农业科技曳圆园园9年第18期

不同菌株果糖基转移酶的活性鉴定与分析

陈利平韩亚伟毛多斌*管丽红陈永森
渊郑州轻工业学院袁河南郑州冤
450002

摘要通过高效液相色谱仪渊HPLC冤分析不同菌种粗酶液对蔗糖的催化反应袁获得了6种产果糖基转移酶的菌种袁为后期果糖基转移
酶的应用打下基础遥
关键词果糖基转移酶曰催化反应曰HPLC
中图分类号Q555.4文献标识码A文章编号1007-5739渊2009冤18-0332-02

ActivityIdentificationandAnalysisofFructosyltransferasefromDifferentStrains
CHENLi-pingHANYa-weiMAODuo-bin*GUANLi-hongCHENYong-sen
渊ZhengzhouUniverstiyofLightIndustry袁ZhengzhouHennan450002冤
AbstractCrudeenzymescatalyzingsucrosewereanalyzedbyhighperformanceliquidchromatography渊HPLC冤fromthedifferentstrains遥The
resultsrevealedthatstrainsexpressingfructosyltransferasewereobtainedinthisstudy袁whichwouldlaythefoundationfortheapplicationof
fructosyltransferase遥
KeywordsFructosyltransferase曰catalyzingreaction曰HPLC

果糖基转移酶一般属于内切酶袁能催化蔗糖水解为葡塔莱氏培养基袁配方参考相应文献[7-9]遥黑曲霉用查氏培养基袁
萄糖和果糖袁并通过转果糖基作用形成低聚果糖遥该酶广泛枯草芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌用塔莱氏培养基袁米曲霉用麸
存在于高等植物和微生物中袁能产生该酶的植物有洋葱尧皮培养基袁其他用LB培养基遥
芦笋尧大麦尧香蕉尧甜菜尧莴苣尧菊苣等曰但工业化生产所用1.3菌种的培养和粗酶液的制备
的果糖基转移酶大多来自于微生物遥1982年袁Gupta等[1]从将菌种接种到相应的固体培养基上袁培养后挑取单菌
Fusariumoxysporum纯化出果糖基转移酶袁并研究低聚果糖落与相应液体培养基中培养遥
的生物合成机遥1989年袁Hirayama等[2]纯化出Aspergillusniger收集菌悬液冰浴30min袁在4益条件下袁10000rpm离心
渊黑曲酶冤的果糖基转移酶出袁并研究酶的特性遥1991年袁20min袁收集上清液和细胞遥将菌体细胞置于柠檬酸-磷酸
Balken等[3]从AspergillusPHoenicis中获得高活性的果糖基转缓冲液中洗涤后袁进行后续的超声波破碎遥经超声波破碎
移酶袁其低聚果糖产率为60%遥1996年袁台糖研究所[4]报道了后袁在4益条件下袁10000rpm条件下离心20min袁收集上清
2株日本曲霉AspergillusjaponicusTIT90076和TITIKJ1中果液袁即为胞内粗酶液遥将粗酶液用超滤膜孔径为30KD的超
糖基转移酶的酶反应动力学和产酶的最适条件遥1997年袁滤杯袁在氮气保护条件下冰浴进行超滤遥滤后酶液在-40益
Euzenat等[5]报道1株枯草杆菌Bacillussubtilis的蔗果聚糖酶下预冻12h袁之后经冷冻干燥机处理制得干粉状粗酶袁在
渊leavansucrase冤在产生菊糖的同时还能生成低聚果糖曰但与4益条件下保存备用遥
黑曲霉产生的低聚果糖有所不同袁其主要成分是蔗果三糖遥1.4酶促反应
其他有关微生物产果糖基转移酶的报道中袁以枯草芽孢杆取8支试管分别加入2.7g60%蔗糖溶液尧0.3g粗酶液袁
菌NCIMB11871的果糖基转移酶基因研究最为详细袁该加入后立即置于不同温度水浴中反应24h遥各反应温度如下袁
酶能特异连接12糖苷键袁但该菌株是专利菌种袁在国枯草杆菌尧巨大芽孢杆菌和霉状杆菌院温度40益袁pH值6.2曰
琢寅
内使用将受到很多限制[6]遥本研究主要通过各菌种的培养袁四联杆菌院温度50益袁pH值6.8曰产气杆菌院温度40益袁pH
以求获得能特异连接12糖苷键的果糖基转移酶的菌值6.8曰黑曲霉院温度30益袁pH值6.2曰青酶院温度30益袁pH值
琢寅
种袁为后期功能性低聚糖的应用研究打下基础遥6.2曰米曲霉院温度40益袁pH=5.5遥反应结束后再置于沸水浴
1材料与方法中灭活10min袁冷却遥所有反应均为磷酸盐-柠檬酸缓冲液遥
1.1试验材料1.5HPLC分析
所用菌种主要有枯草芽胞杆菌尧巨大芽胞杆菌尧产气杆检测仪器院Wate