进出口食品中1，3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯的测定_征求意见稿.doc

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中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布
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出口食品中1，3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯的测定液相色谱-蒸发光散射测定法

Determinationof1,3-dioleoyl-2-palmitoyltriglycerideinFood
forexport——HPLC–ELSDmethod

（征求意见稿）

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SN
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
ICS

备案号：
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前言
本标准的附录A、附录B、附录C、附录D均为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准由中华人民共和国江苏出入境检验检疫局和南京同凯兆业生物技术有限责任公司负责起草。
本标准主要起草人：丁涛、吴斌、陈惠兰、周苏云、杨蕴毅、张磊、黄小权、应汉杰。

出口食品中1，3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯的测定
液相色谱-蒸发光散射测定法

范围
本标准规定了婴幼儿奶粉中1，3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯的液相色谱-蒸发光散射检测方法。
本标准适用于婴幼儿奶粉中1，3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯的测定。
方法提要
试样中的1，3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯用碱性溶液解离，混合有机溶剂提取，用液相色谱-蒸发光散射检测器测定，外标法峰面积定量。
试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。
浓氨水（28％）。
乙醚。
乙醇。
石油醚。
二氯甲烷：色谱纯。
丙酮：色谱纯。
1，3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯（1,3-dioleoyl-2-palmitoyltriglyceride，简称：OPO；CAS号：1716-07-0，分子式：C55H102O6）标准品：纯度大于或等于99.0%。
标准储备液：准确称取适量1，3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯标准品，分别用二氯甲烷稀释至适当浓度。此溶液在0℃～4℃避光保存。
标准工作溶液：将标准储备液用二氯甲烷稀释到适当浓度的的标准工作溶液。置于0℃～4℃避光保存。
0.22μm微孔滤膜，有机系。
仪器和设备
高效液相色谱：配蒸发光散射检测器（ELSD）。
天平：感量为0.1mg和0.01g。
离心机：10000r/min。
旋转蒸发仪。
具塞塑料离心管：50mL。

试样制备与保存
试样制备
婴幼儿奶粉：取代表性样品500g，混匀，均分成两份作为试样，分装入洁净的容器内，密闭并标明标记。
试样的保存
样品放置在常温下避光保存。
在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
测定步骤
提取
称取婴幼儿奶粉样品1g（精确到0.01g）至抽脂管中，加入10mL65±1℃的水溶解，振摇，使样品完全分散。在样品中加入2mL氨水，于65±1℃水浴锅中放置15min，取出轻摇，冷至室温。在冷却后的样品中加入10mL乙醇，混匀，加入25mL乙醚，加塞振摇1min，加入25mL石油醚，加塞振摇1min，静置、分层，有机层转入磨口烧瓶中，再重复操作一次。合并抽提液于磨口烧瓶中，用旋转蒸发仪浓缩至干。二氯甲烷稀释至50mL，取适量过滤膜，供液相色谱测定。
测定
液相色谱条件
色谱柱：ChromSpherLipidsSilverIonHPLCColumn,250×4.6mm或相当者；
柱温：室温；
流动相：二氯甲烷和丙酮，梯度洗脱程序见附录A中表A；
流速：0.80mL/min；
进样量：20L；
漂移管温度：55℃；
氮气流速：1.5L/min；
定性、定量
按照6.2.1液相色谱条件测定样液和标准工作溶液，外标标准曲线法测定样液中的1，3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯含量。样品中待测物含量应在标准曲线范围之内，如果超出标准曲线范围，应用进行适当稀释。在上述色谱条件下，1，3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯的质量色谱峰保留时间约为20.1min。标准品的色谱图见附录B。
在相同实验条件下，样品与标准工作液中待测物质的色谱峰保留时间偏差在±2.5%以内。
空白试验
空白样品，按上述测定步骤进行。
结果计算和表述
用数据处理软件中的外标法，或绘制标准曲线，按式（1）计算样品中1，3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯含量。
…………………………………………（1）
式中：——试样中1，3-二油酸2-棕榈酸甘油三酯含量，单位为克每千克（g/kg）；——由标准曲线得到的样液中待测物的浓度，单位为克每毫升（g/mL）；——由标准曲线而得的空白实验中的待测物的浓度，单位为克每毫升（g/mL）；——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；——最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。测定低限、回收率
测定低限
本方法检测低限均为5g/kg。
回收率
在不同婴幼儿奶粉中回收率为76