高效液相色谱法测定甲硝唑中甲硝唑含量的不确定度报告.doc

高效液相色谱法测定甲硝唑中甲硝唑含量的不确定度报告
依据的技术标准
《中国药典》2015年版二部。
测量原理
高效液相色谱法的基本原理是在高压下，利用不同组分与固定相和液体流动相作用力不同，实现分离的的色谱方法。高压输液泵将流动相泵入装有固定相的色谱柱，对由进样器注入色谱柱的待分离组分进行分离，分离后的各组分依次进入检测器，检测信号通过积分仪或数据处理系统记录与处理，实验各组分定性与定量分析。
使用的仪器和试剂
岛津公司LC-20AT型高效液相色谱仪，经检定合格。
甲硝唑对照品，由中国食品药品检定研究院提供，含量100%。
经检验合格容量瓶100mL，A类，在20℃时，允差±0.1mL；容量瓶50mL，A类，在20℃时，允差±0.05mL；移液管5ml，A类，允差±0.015mL。
3.4电子天平最大允许误差为:±0.5mg，电子天平最小鉴别力为0.00001g。
测量程序
对照品溶液的制备：
精密称取甲硝唑对照品①0.02602g②0.02552g，分别置100mL容量瓶中，用流动相甲醇：水（20:80）稀释至刻度，摇匀。
供试品溶液的制备
取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于甲硝唑0.25g），置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使甲硝唑溶解，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
4.3测定法：精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
数学模型和不确定度传播率
甲硝唑片中甲硝唑的含量测定的数学模型
(1)
式中，C样——被测样品的浓度，mg/mL；
C对——甲硝唑对照品浓度，mg/mL；
A样——被测样品中甲硝唑的峰面积；
A对——甲硝唑对照品的峰面积；
将输入量C对、A样、A对和C样的重复性因素组合在一起，归入输出量含量（%）的重复性因素，因此不需分别评定各输入量重复性引入的不确定度分量，而是直接评定测量结果含量（%）的重复性引入的不确定度分量。为此将式(1)改写如下
(2)
式中，fr是测量重复性，其数值为1。
不确定度来源
样品中甲硝唑含量（%）的不确定度来源有4个方面：
6.1电子天平引入的相对标准不确定度ux：用电子天平多次称量1g标准砝码测量结果进行统计分析引入的测量不确定度μ1，即A类测量不确定；电子天平制造误差引入的测量不确定度μ2；电子天平最小鉴别力引入的测量不确定度μ3。
6.2对照品溶液制备引入的相对标准不确定度ur(CS)，包括包括3个来源：对照品的含量按100%计算，说明书未标明不确定度，未引入相对标准不确定度；稀释中容量瓶引入的相对标准不确定度ur(V1)，其包含定容、温度影响和重复性。重复性归入到输出量含量（%）的重复性fr中。因此只需要评定100mL容量瓶体积定容和温度引入的标准不确定度分量。实验室温度可控制在(20±5)℃，引起的体积相对变化约为±0.1％，可忽略不计。因此只需要评定体积定容引入的标准不确定度分量。
6.3供试品溶液制备引入的相对标准不确定度ur(Cx)，包括2个方面，配制过程中100mL、50mL容量瓶引入的相对标准不确定度分别为ur(V1)、ur(V2)，其包含定容、温度影响和重复性。重复性归入到输出量含量（%）的重复性fr中。因此只需要评定100mL、50mL容量瓶体积定容和温度引入的标准不确定度分量；稀释中5mL移液管引入的相对标准不确定度ur(V3)；其包含定容、温度影响和重复性。重复性归入到输出量含量（%）的重复性fr中，实验室温度可控制在(20±5)℃，引起的体积相对变化约为±0.1％，可忽略不计。因此只需要评定体积定容引入的标准不确定度分量。
6.4测量重复性fr引入的相对标准不确定度ur(fr)。
标准不确定度评定
7.1称量过程引入的测量不确定度Ux评定
1）电子天平多次称量1g标准砝码，对统计数据进行分析引入的测量不确定度，即A类评定μ1
用电子天平测1g标准砝码数据如下：
0.99998(g)、0.99983(g)、1.00006(g)、1.00003(g)、0.99996(g)、1.00000(g)、1.00002(g)
0.99998(g)、1.00005(g)、1.00001(g)
根据公式获得电子天平单次测量引入的不确定度为：
（n=10）
μ1=0.07（mg）
2）电子天平最大允许误差引入的的测量不确定度μ2（取均匀分布）
电子天平最大允许误差为:±0.5mg
则测量不确定度为：

3）电子天平最小鉴别力引入的测量不确定度μ3（取均匀分布）
电子天平最小鉴别力为0.01mg
则测量不确定度为：

上面各分量互不相关，灵敏系数为1，则相对测量不确定度为：

7.2对照品