靶向人ERG基因的siRNA重组慢病毒表达载体的构建与鉴定的中期报告.docx

靶向人ERG基因的siRNA重组慢病毒表达载体的构建与鉴定的中期报告
中期报告
1.研究背景
ERG基因是Ets转录因子家族中的一员，其融合基因ERG的产生与多种癌症的发生相关。ERG基因也是前列腺癌中最常见的结构变异基因之一，其编码的蛋白质ERG是一种转录因子，在细胞命运决定和转录调控中起着重要的作用。针对ERG基因的抑制可以有效治疗ERG相关的癌症。
siRNA是一种针对性的小分子RNA，可以通过RNA干扰（RNAinterference，RNAi）机制靶向抑制特定基因的表达。siRNA技术已被广泛用于研究基因功能和基因治疗。以siRNA为核心的RNAi技术也是细胞治疗的一种新型技术，可以通过介导基因表达的抑制和增强来治疗疾病。
2.研究目的
本研究旨在构建一种针对人ERG基因的siRNA重组慢病毒表达载体，并对其进行鉴定。通过成功构建该载体，可以为进一步的研究提供有效的治疗策略，为开发ERG相关癌症的基因治疗方案提供新的思路。
3.主要研究内容和方法
本研究的主要内容是通过基因克隆技术将siRNA序列插入到重组慢病毒表达载体中，制备一种针对人ERG基因的siRNA重组慢病毒表达载体，并对其进行鉴定。
具体方法如下：
（1）设计合适的siRNA序列，克隆到载体中。
（2）通过PCR扩增获得重组慢病毒表达载体。
（3）利用限制酶切和DNA测序技术对克隆结果进行鉴定。
（4）将重组慢病毒表达载体转染到293T细胞中，通过Westernblot检测ERG蛋白的表达情况。
（5）倒转录PCR进行siRNA的功能评价。
4.预期结果
通过本研究的实验操作，我们预期可以成功构建一种针对人ERG基因的siRNA重组慢病毒表达载体，并在细胞水平上对其进行鉴定。另外，我们也预期可以验证该siRNA的有效性及其治疗效果。
5.参考文献
1.Tomlins,S.A.,etal.,RecurrentfusionofTMPRSS2andETStranscriptionfactorgenesinprostatecancer.Science,2005.310(5748):p.644-8.
2.Wang,X.,etal.,RNAinterferencetargetingETStranscriptionfactorERGinducesapoptosisandinhibitsinvasionofhumanprostatecancercells.OncolRep,2010.23(4):p.1305-12.
3.Shinojima,T.,etal.,TargetingtheNotchpathwayinducesapoptosisandattenuationofmineralizationinhumanosteoblasts.Bone,2011.48(2):p.372-9.
4.Guo,D.,etal.,Identificationofnoveltargetsforcancertherapyusinglabel-freequantitativeproteomicsandproteininteractionnetworks.BasicClinPharmacolToxicol,2012.110(4):p.318-24.