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C-myc基因慢病毒载体的构建及其鉴定的中期报告
一、研究背景
C-myc基因是一个重要的原癌基因，其在肿瘤的发生和发展中发挥着重要的作用。C-myc基因的高度表达在多种肿瘤中都有发现，如淋巴瘤、乳腺癌、肺癌等，因此成为肿瘤治疗的一个研究热点。
慢病毒是一种常见的基因转移载体，具有高效稳定的基因转录和细胞内稳定的转基因表达等特点。因此，本研究将设计构建一个c-myc基因慢病毒载体，通过慢病毒转染技术将其转染到人类肝癌细胞株，从而对c-myc基因在肝癌细胞中的表达和作用进行研究。
二、实验设计
1.克隆c-myc基因序列。从人类基因组中提取c-myc基因序列，利用PCR方法扩增出完整的c-myc基因。
2.构建c-myc基因慢病毒载体。选用pLenti-CMV-GFP-Puro-3Xflag质粒为骨架，克隆c-myc基因序列到其中，构建c-myc基因慢病毒载体。
3.病毒包装和纯化。将构建好的c-myc基因慢病毒载体转染到包装细胞293T中，经过72小时，采集包液进行纯化处理，得到高纯度的c-myc基因慢病毒。
4.慢病毒转染实验。将纯化后的c-myc基因慢病毒转染到人类肝癌细胞株中，通过RT-PCR和Westernblot等方法检测c-myc基因的表达情况，以及其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。
三、实验进展
1.已成功克隆出c-myc基因序列，并对其进行了测序验证。
2.已将c-myc基因序列克隆到pLenti-CMV-GFP-Puro-3Xflag质粒中，并经过测序验证。
3.已经构建出c-myc基因慢病毒载体，并通过DNA测序鉴定其正确性。
4.正在进行c-myc基因慢病毒的包装和纯化实验，预计将在两周内完成。
四、总结与展望
本研究将设计构建一个c-myc基因慢病毒载体，通过转染到人类肝癌细胞株中，研究c-myc基因在肝癌细胞中的表达和作用。目前已完成了c-myc基因序列的克隆和慢病毒载体的构建，并正在进行慢病毒的包装和纯化实验。预计在两周内完成慢病毒转染实验，并对其进行进一步的验证和分析。该研究有望为肝癌治疗提供新的理论和实验依据。