蜂蜜中氯舒隆残留量的测定_液相色谱-串联质谱法（编制说明）.doc

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《蜂蜜中的氯舒隆残留量的测定液相色谱-串联质谱法》
编制说明

一、任务来源
本标准是根据国标委2012年下达的任务，由秦皇岛出入境检验检疫局承担的名称为《蜂蜜中氯舒隆残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法》国家标准而研究制定的，其计划编号为2012B127。

二、标准制定的意义和特点
氯舒隆（Clorsulon），又名克洛索隆，化学名称为4-氨基-6-（三氯乙烯）-间-苯基亚硫胺，是一种苯硫酰胺类化合物，氯舒隆，又名克洛索隆，是一种近年来被广泛用于肉牛及奶牛的饲养中的苯硫酰胺类药物，用于治疗和控制家牛肝蛭(血吸虫)的成虫所引起的肝炎及肝肿大。氯舒隆通过抑制葡萄糖的降解酶，阻断肝蛭主要的能量来源来发挥其药理作用。欧美等国家均已制定了氯舒隆在牛奶及其制品中的限量要求，比如澳大利亚规定在牛奶中的最大允许限量为1.5mg/kg，虽然目前还没有发现在蜜蜂饲养方面使用该类药物，但是日本肯定列表中已经提出了对氯舒隆药物的检测要求，其限量为20μg/kg，而在我国尚无此限量要求。

三、标准编制的依据
本标准是按照GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》的要求编写的。
本标准去其他SN标准项目、GB标准项目及其他立项均无重复，系首次制定的相关标准。

四、标准制订的主要过程
本标准起草人通过查阅相关资料和文献，结合本实验室的条件和本方法的技术特点，对蜂蜜中氯舒隆的残留量进行了研究。并对样品的提取、净化进行了大量的实验，又通过室内回收率、精密度及应用范围等一系列研究，建立了一种测定蜂蜜中氯舒隆残留的液相色谱-串联质谱方法。
目前已有文献报道的检测方法有采用分散固相萃取净化，HPLC-UV检测氯舒隆残留；对样品进行硅烷化衍生后采用GC-MS方法来检测牛肾中氯舒隆残留。采用Quechers法对样品进行净化，液相色谱-质谱/质谱法进行检测。
本方法在参考以上文献的基础上，建立了用Tris缓冲溶液提取蜂蜜中氯舒隆，ProElutC18-U固相萃取柱萃取、净化，液相色谱-串联质谱检测氯舒隆残留的新方法。该方法提取操作简单、回收率稳定、灵敏度高、选择性好。其检出限达到5.0µg/kg，完全满足世界各国对该类药物残留限量的检测要求。
2012.2～2012.4：标准品的购买、标准溶液的配制、质谱条件、液相条件的优化。
2012.4～2013.4：样品前处理条件的优化。
2013.5～2013.8：线性范围、测定低限的确定以及不同添加浓度回收率数据的采集
2013.9～2013.11：标准文本及编制说明的撰写。
本标准主要由以下项目组成员完成：曹彦忠、贾光群、王蕾、李响、石玉秋。

五、方法技术论证
1.提取净化条件的优化
（1）提取溶液的选择
根据相关文献资料，从样品中提取氯舒隆药物的主要提取溶液有0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液、0.1mol/L碳酸氢钠缓冲溶液、0.1mol/LTris缓冲溶液，我们对此进行了对比实验，实验结果见表1。

表1不同提取溶液的提取效果（%）
药物名称提取液
药物名称0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液0.1mol/L碳酸氢钠缓冲溶液0.1mol/LTris缓冲溶液氯舒隆回收率70.26598.5
从表中数据可以看出，当用磷酸盐缓冲溶液作为提取液时，氯舒隆的回收率小于80%；当用碳酸氢钠溶液作为提取液时，氯舒隆的回收率不到70%；当用Tris缓冲溶液作为提取液时，回收率在83.5%～115.0%范围,而且回收率相对比较稳定。所以本方法采用0.1mol/LTris缓冲溶液作为提取溶液。
（2）不同pH值的缓冲溶液对回收率（％）的影响
在对0.1mol/LTris缓冲溶液最佳pH值范围进行的选择实验中发现，当pH值在4～10范围内变化时，氯舒隆回收率相对都比较高而且稳定，82～106%，其pH值对其回收率无太大的影响，pH=9时回收率最好，定其pH值为9。实验结果见表2。
表2不同PH值的缓冲溶液对回收率的影响（%）
pH值
药物名称4.05.06.07.08.09.010氯舒隆回收率91.487.685889510680.2
（3）不同固相萃取柱对回收率的影响
在前述选定条件下，对OasisHLB(6mL/200mg)、OasisHLB(6mL/500mg)、SupelcoC18（3mL/500mg）、ProElutC18-U（6mL/500mg）和ProElutC18-U（6mL/1000mg）五种固相萃取柱的萃取效率进行了比较。由于上述几种固相萃取柱所带的基团、填料粒度、形状以及充实度不同，从而影响液体从固相萃取柱滴下的速度，以及氯舒隆在柱体上的保留而导致回收率的差异。通过试验数据表明ProElutC18-U（6