重组survivin腺病毒对喉癌细胞抗凋亡作用的体外实验研究的开题报告.docx

重组survivin腺病毒对喉癌细胞抗凋亡作用的体外实验研究的开题报告
一、选题背景和意义
喉癌是一种恶性肿瘤，多数发生于喉部的上皮组织，常见于中老年人。治疗手段包括手术切除、放疗、化疗等，但存在复发或耐药等问题。近年来，基因治疗成为一种新兴的治疗方式，其中腺病毒载体是重要的基因治疗工具之一。
Survivin是一种重要的凋亡抑制蛋白，其在多种肿瘤细胞中高表达。前人研究表明，抑制Survivin表达可以促进肿瘤细胞凋亡，从而达到治疗肿瘤的效果。因此，利用大肠杆菌表达的重组腺病毒载体，将Survivin的siRNA和Cas9融合到一起，能够更好地改变病毒感染和宿主细胞的生物学性质。
该研究旨在利用重组survivin腺病毒对喉癌细胞的抗凋亡作用进行体外实验研究，为探索利用腺病毒载体进行基因治疗喉癌的新方法提供一定的理论和实验基础。
二、研究内容和方法
1.实验内容：
本实验将探究重组survivin腺病毒对喉癌细胞的抗凋亡作用。
2.研究方法：
（1）体外培养喉癌细胞系CNE2：采用DMEM高糖培养基培养，添加10%FBS，温度为37℃，CO2浓度为5%。
（2）构建重组survivin腺病毒：将Survivin的siRNA和Cas9融合到一起，再结合腺病毒载体进行构建，采用大肠杆菌表达。
（3）病毒感染喉癌细胞：将已构建好的重组survivin腺病毒加入喉癌细胞培养基中，使其感染，观察细胞的生长状态和凋亡情况，通过MTT检测细胞增殖率。
（4）Westernblot分析：对控制组和实验组的细胞进行蛋白质提取和电泳，将各种蛋白质用抗体进行过筛，得出凋亡相关蛋白的表达情况。
三、预期结果和创新性
通过对重组survivin腺病毒感染喉癌细胞的实验结果，可以预期其能够显著抑制Survivin的表达，促进喉癌细胞凋亡，达到抗癌的目的。同时，本研究所采用的构建重组腺病毒的方法及测量细胞凋亡情况的方法具有一定的创新性，可为喉癌的基因治疗提供新思路和实验基础。
四、研究意义
本实验的研究结果有望为喉癌的基因治疗提供新的理论和实验基础，有利于推广重组腺病毒在临床上的应用以及喉癌的治疗方案的改进和优化。在基因治疗领域中，探索利用腺病毒载体进行基因干预的新方法和新技术将会具有广泛的应用前景和深远的意义。