hTNF-α抗体的制备及人鼠嵌合型基因工程抗体的研究的开题报告.docx

hTNF-α抗体的制备及人鼠嵌合型基因工程抗体的研究的开题报告
开题报告
一、选题背景
TNF-α（tumornecrosisfactor-alpha），又称为肿瘤坏死因子-alpha，是由巨噬细胞、T淋巴细胞以及其他细胞合成的一种细胞因子。它广泛参与多种免疫细胞的活动，如炎症、发热、血管生成等，同时也是某些疾病的关键因子，如类风湿性关节炎、克隆病和风湿性心脏病等。因此，研发治疗TNF-α相关疾病的药物具有极高的临床价值，并且对于抵抗肿瘤和病毒感染等方面也具有一定的意义。
虽然TNF-α是细胞因子，但是目前已经有不少抗体治疗药物应用于TNF-α相关疾病。但是，这些药物通常具有较小的抗原特异性，因此存在许多严重的副作用，如感染、慢性疾病等，对患者生命造成威胁。
基因工程技术的发展为解决这一问题提供了一种新的思路。相比较传统的药物，基因工程技术生产的抗体具有更强的特异性、亲和力及生物活性，能够显著降低副作用的发生率，具有更好的治疗效果。因此，本项目旨在开展hTNF-α的抗体制备及人鼠嵌合型基因工程抗体的研究，期望能够为TNF-α相关疾病的治疗提供选择。
二、研究内容与目标
2.1制备hTNF-α抗体
采用重链变异技术，通过免疫小鼠获得单克隆抗体，并对其进行克隆扩增和纯化，得到高纯度的hTNF-α抗体。
2.2构建人鼠嵌合型基因工程抗体
将hTNF-α抗体的variableregion融合到人IgG抗体框架中，构建出人鼠嵌合型基因工程抗体。通过表达在CHO或HEK293细胞中等方法获得抗体，对其进行活性检测、稳定性测试等。
2.3研究抗体的亲和力、特异性及生物活性
使用生物学实验验证抗体对hTNF-α的特异性和亲和力，并对其生物活性进行评估。此外，还需要进行体内体外实验，比较构建的人鼠嵌合型基因工程抗体与市面上已有药物的治疗效果，以此为依据评价抗体在临床上的应用价值。
2.4目标
最终目标为开发一种治疗TNF-α相关疾病的基因工程抗体，具有高特异性、高亲和力、高生物活性和最小副作用的优势，提供更加安全、有效的药物选择。
三、研究方法
3.1抗原制备
使用工具表达大肠杆菌(Escherichiacoli)表达hTNF-α。
3.2小鼠免疫及单克隆抗体制备
将hTNF-α注射入BALB/c小鼠体内，进行免疫，并通过ELISA筛选获得单克隆抗体，然后克隆扩增和纯化获得hTNF-α单克隆抗体。
3.3人鼠嵌合型抗体构建
将hTNF-α克隆扩展出的singlechainvariablefragment(scfv)与人IgG框架蛋白基因相融合，获得人鼠嵌合型基因工程抗体。接着，使用重组技术将构建好的DNA插入到CHO或HEK293等细胞中进行表达，获得目标蛋白，并进行纯化。
3.4抗体的特异性检测及生物活性评估
采用ELISA，Westernblot和免疫组化等方法检测抗体的特异性。使用细胞功能实验证明抗体的生物活性，包括抑制hTNF-α诱导的细胞凋亡以及细胞因子的释放等方面。
四、预期结果及意义
4.1预期结果
预期可以获得高纯度的hTNF-α单克隆抗体以及人鼠嵌合型基因工程抗体，并评估其亲和力、特异性及生物活性。同时还将和已经上市的制剂进行比较，从中找到最好的候选药物，为下一步的临床研究提供有效的药物选择。
4.2意义
本项目开展的抗体制备及人鼠嵌合型基因工程抗体的研究，将不仅有助于探究TNF-α的生物学特性，而且也有望为TNF-α相关疾病的治疗提供最有效的药物选择，同时也为抗体研究领域的发展提供基础支持。