具有ACE抑制活性的三肽.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108997477A(43)申请公布日2018.12.14(21)申请号201810815190.0(22)申请日2018.07.11(71)申请人渤海大学地址121013辽宁省锦州市松山新区科技路19号(72)发明人于志鹏樊玥赵文竹(51)Int.Cl.C07K5/087(2006.01)C07K5/097(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称具有ACE抑制活性的三肽(57)摘要本发明主要涉及具有ACE抑制活性的三肽，肽序列分别为WGK和FQK，属于生物技术领域。本发明借助在线数据库，通过对蛋白质虚拟酶解，预测活性肽潜在活性、水溶性、ADMET(吸收、代谢和毒性)性质，并经分子对接等多轮筛选，利用高效液相色谱法验证体外ACE抑制活性后得到两种具有抑制ACE活性的三肽。本发明涉及的两种活性肽其序列短，安全且易于获得。CN108997477ACN108997477A权利要求书1/1页1.具有ACE抑制活性的三肽，其特征是，所述三肽的氨基酸序列分别为WGK和FQK。2.如权利要求1所述的具有ACE抑制活性的三肽，其特征是，WQK与ACE(PDBID：1O86)相互作用涉及的催化位点的氨基酸残基分别为Gln281，Tyr520，His353，His513，Tyr523，Glu384和Lys511；FQK与ACE(PDBID：1O86)相互作用涉及的催化位点的氨基酸残基分别为Ala354，His353，His513，Tyr523，Tyr520和Lys511。3.如权利要求1所述的具有ACE抑制活性的三肽，其特征是，三肽WGK和FQK均来自鸡蛋，包括以所述具有ACE抑制活性的三肽序列为核心，任何对其进行的相应的调整或修饰。2CN108997477A说明书1/4页具有ACE抑制活性的三肽技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，主要涉及具有ACE抑制活性的三肽。背景技术[0002]血管紧张素转化酶(Antiotensin-IConvertingEnzyme，ACE，EC3.4.15.1)是一种含锌的二肽羧酶，能被氯离子激活，并具有较宽的底物特异性。ACE对机体血压和心血管功能起着重要的调节作用。抑制ACE的活性被认为是治疗高血压的一种重要而有效的方法。实验证明，一些食物蛋白质来源的ACE抑制肽无毒副作用，安全性极高，且对血压正常者无降血压作用。随着生物信息学的发展以及生物活性肽研究的深入，越来越多蛋白质的一级结构及活性肽的氨基酸序列得到了阐明，蛋白酶的酶切位点也越来越明确。为从原料蛋白质中寻找未知序列的生物活性肽提供了基础，并提供了科学的依据。更多的蛋白质三维结构被确证，产生的大量蛋白已经被选做潜在治疗靶标进行研究，因而拓展了分子对接技术和虚拟筛选方法在小分子设计开发中的应用范围。针对食源性生物活性肽的虚拟筛选方法是一种有效的研究手段，是依靠计算机的辅助作用来筛选具有潜在生物活性氨基酸序列的关键技术。利用在线数据，不仅减少筛选强度和缩短研发周期，还提高了筛选成功的概率。将这种方法运用在ACE抑制肽基于分子对接技术的虚拟筛选方法中，能够大量节省研究成本而且有效地缩小了鉴定ACE抑制肽的周期。在传统获得ACE抑制肽的方法中，食源性蛋白酶解产物组分复杂，含有成百至上千条肽段，而且分子量相近或电荷相等的肽段难以进行分离纯化，对于后续的结构鉴定带来了巨大的难题。不仅要花费大量时间用来分离纯化，而且难以得到高纯度、单一的物质，虚拟筛选的应用可以有效解决ACE抑制肽在筛选过程中面临的难题。发明内容[0003]本发明通过利用生物信息学的方法，借助在线活性肽数据库，利用活性肽的分子量、生物活性评分、水溶性、ADMET(吸收、代谢和毒性)等性质进行多轮筛选，结合分子对接得到与ACE(PDBID：1O86)稳定结合的两种生物活性肽，并通过高效液相色谱法证实其体外ACE抑制活性，其三肽序列分别为WGK和FQK，对应IC50值分别为222.74μM和250μM。最后利用分子对接软件，阐明ACE-WGK和ACE-FQK相互作用与结合位点。[0004]本发明的技术方案：[0005]具有ACE抑制活性的三肽，其氨基酸序列分别为WGK和FQK。[0006]所述三肽来自鸡蛋蛋白，包括以所述ACE抑制活性的肽序列为核心，任何对其进行的相应的调整或修饰。[0007]所述ACE-WGK催化位点的氨基酸残基分别为Gln281，Tyr520，His353，His513，Tyr523，Glu384和Lys511。ACE-FQK催化位点的氨基酸残基分别为Ala354，His353，His513，Tyr523，Tyr520和Lys511。[0008]本发明中所涉及的各项实验方法具体如