预览加载中，请您耐心等待几秒...

聚丙烯酰胺凝胶电泳.ppt

预览
1/10
2/10
3/10
4/10
5/10
6/10
7/10
8/10
9/10
10/10

亲，该文档总共32页，到这已经超出免费预览范围，如果喜欢就直接下载吧～

下载提示 文本预览

如果您无法下载资料，请参考说明：

1、部分资料下载需要金币，请确保您的账户上有足够的金币

2、已购买过的文档，再次下载不重复扣费

3、资料包下载后请先用软件解压，在使用对应软件打开

实验目的【SDS-PAGE简介】CH2=CH【SDS-PAGE的特点】PAGE分为连续系统和不连续系统两大类。 连续系统：电泳体系中缓冲液PH值及凝胶浓度相同，带点粒子在电场中，主要靠电荷效应和分子筛效应。 不连续系统：带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应，还具有浓缩效应、因而其分离条带清晰度及分辨率均较佳。 当蛋白质分子量在15,000到200，000Da之间时，蛋白质的相对迁移率与分子量的对数呈线性关系。 lgMW=K-bmR MW是蛋白质的分子量，K为常数，b为斜率，mR为电泳相对迁移率。 相对迁移率mR=将已知分子量的标准蛋白质在SDS-PAGE中的电泳迁移率对分子量的对数作图，即可得到一条标准曲线。只要测得未知分子量的蛋白质在相同条件下的电泳迁移率，就能根据标准曲线求得其分子量。浓缩效应浓缩效应浓缩效应浓缩效应浓缩效应分子筛效应分子筛效应电泳过程中分子迁移的规律，小分子走在前头，大分子滞后。电泳凝胶相当于凝胶过滤中的一个带孔胶粒。SDS-PAGE原理中的四个不连续性【SDS-PAGE实验操作】1）分离胶的制备（按表1配制10%的分离胶P24） 将制备的分离胶溶液，用滴管加至长、短玻璃板间的窄缝内，加胶高度距顶部约1cm（约第一道红线处）。用滴管加一层重蒸水,用于隔绝空气，使胶面平整。约30min凝胶完全聚合。将贮槽的蒸馏水倒去。将制备的浓缩胶溶液加到长、短玻璃板的窄缝内，直至短玻璃上缘，然后插入梳子。静置20min左右，上胶即可聚合，轻轻取出样品槽模板。3、蛋白质样品的处理2）待测样品处理 用微量注射器吸取15μl酪蛋白样品于小离心管EP管内，再用微量注射器吸取15μl上样缓冲液混合，盖上盖子，在沸水浴中加热5min，取出冷却后加样。5、加样 6、电泳7、染色与脱色8、结果处理【注意事项】搭好制胶台思考题