菌种保藏的方法.ppt

一、菌种保藏的目的

①菌种存活，不丢失，不污染
②防止优良性状丧失
③随时为生产、科研提供优良菌种二、菌种保藏的原理：三、菌种保藏的方法斜面低温保藏法

方法：接种适宜斜面培养基→培养→4℃保藏
原理：低温下，微生物代谢强度明显下降
适用：各大类
保藏期：3-6个月
缺点：保存期短，传代多，易退化

半固体穿刺保藏法

方法：适宜半固体→培养→4℃保藏
原理：缺氧、低温
适用：好气性细菌，酵母等
保藏期：6-12个月
步骤：
用接种针从原菌种斜面上挑取少量菌体，从柱状培养基中心自上而下刺入，至培养基的1/2处，待微生物生长良好后覆盖2-3mm无菌液体石蜡.石蜡可防止培养基失水又隔绝氧气,降低代谢.但不适用于可以石蜡为碳源的微生物.砂土管干燥保藏法

方法：将干燥砂粒与细土混合后灭菌制成砂土管，然后接种保藏。
原理：无营养，缺氧，干燥
适用：产孢子的丝状真菌、放线菌；有芽孢的细菌
保藏期：2-10年或更长
河沙无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面。真空冷冻干燥保藏法：步骤复苏方法：

——先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，
——将安瓿管顶部烧热，
——用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，
——用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管移入新鲜培养基上，进行适温培养。液氮超低温保藏法菌种的准备可采用下列几种方法：

刮取培养物斜面上的孢子或菌体，与保护剂混匀后加入冻存管内；
接种液体培养基，振荡培养后取菌悬液与保护剂混合分装于冻存管内；
将培养物在平皿培养，形成菌落后，用无菌打孔器从平板上切取一些大小均匀的小块（直径约5-10毫米），真菌最好取菌落边缘的菌块，与保护剂混匀后加入冻存管内；
在小安瓿管中装1.2-2毫升的琼脂培养基，接种菌种，培养2-10天后，加入保护剂，待保藏。复苏方法：

从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。菌种冻存管四、菌种保藏的注意事项7种常用菌种保藏方法的比较菌种保藏机构

Ex：美国的标准菌种保藏所（ATCC）
美国农业部农业研究服务部（ARS）
英国国立标准菌种保藏所（NCTC）
我国：1普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC）
2农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC）
3工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）
4医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）
5抗生素菌种保藏管理中心（CACC）
6兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）