重组DNA技术重组DNA技术相关概念DNA克隆克隆.ppt
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生物化学与分子生物学DNA重组和重组DNA技术DNARecombinationandRecombinantDNAtechnologyDNA重组(DNArecombination)是指不同DNA分子断裂和连接而产生DNA片段的交换并重新组合形成新DNA分子的过程。重组DNA技术(recombinantDNAtechnology)是指在体外将两个或两个以上DNA分子重新组合并在适当细胞中增殖形成新DNA分子的过程。第一节自然界DNA重组和基因转移DNARecombinationandGeneTransferi
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重组DNA技术与基因工程3重组DNA技术的操作过程ADNA的体外重组(切与接)同种内切酶生产的粘性末端的连接同尾酶生产的粘性末端的连接不同粘性末端的连接人工粘性末端的连接5‘突出末端人工粘性末端的连接3‘突出末端人工粘性末端的连接平头末端基于同源重组的In-Fusion连接重组率重组率重组率B重组DNA分子的转化和扩增(转与增)转化的原理与技术转化的原理与技术转化的原理与技术转化的原理与技术转化的原理与技术转化率转化率转化率转化率的用途转化率转化率的影响因素转化率转化率转化率的影响因素转化细胞的扩增转化细
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第二节工具酶(一)基本知识RE将侵入细菌体内的外源DNA切成小片断。细菌自身的DNA碱基被甲基化酶甲基化修饰所保护,不能被自身的限制性内切酶识别切割。3.性质:内切酶,在核酸分子链的内部制造切口的酶。4.功能:自我保护作用I型限制性内切酶首先由M.Meselson和R.Yuan在1968年从大肠杆菌B株和K株分离的。(2)识别位点序列需ATP、Mg2+和SAM(S-腺苷蛋氨酸)。类型Ⅰ:大型的多亚基的蛋白质。具有内切酶的活性、具有甲基活性化酶的活性。具限制和修饰两种体系,切割位点基本上是随机。因此Ⅰ型内切
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重组DNA实验技术扬州大学兽医学院微生物组二○○六年十月目录实验一质粒DNA小规模制备、定量实验二DNA限制性内切酶酶切、电泳实验三感受态细胞制备实验四PCR及RT-PCR定实验五核酸杂交技术实验六DNA连接、转化及重组DNA的鉴实验七外源基因在大肠杆菌中诱导表达及表达产物的鉴定实验一质粒DNA的小规模制备及定量一、实验目的1、了解碱裂解法制备质粒DNA的基本原理;2、掌握碱裂解法的具体操作方法和注意事项;3、学会常见的DNA定量方法。二、实验原理碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体D