实时荧光定量PCR简介、结果分析及报告.docx
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实时荧光定量PCR简介、结果分析及报告一、内容描述简称RTqPCR)是一种分子生物学技术,广泛应用于基因表达分析、病原体检测、突变分析等领域。该技术通过实时监测PCR过程中的荧光信号,实现对特定基因或序列的定量分析。本文将对实时荧光定量PCR进行简介、结果分析以及报告生成进行详述。在实时荧光定量PCR简介部分,我们将介绍PCR的基本原理和技术发展。实时荧光定量PCR技术的核心在于其荧光探针的使用,这些探针能够在PCR过程中特异性地识别并报告目标序列的扩增情况。通过对PCR过程中荧光信号的实时监测和数据分析
实时荧光定量PCR实验结果分析.ppt
实时荧光定量PCR实验结果分析定量分析绝对定量相对定量绝对定量:HowMany–优点:给出目标基因初始模板的绝对数量,数据容易处理–缺点:必须有标准品,做标准曲线–应用:病毒拷贝数;转基因的拷贝数;转基因成分百分含量检测108108108T相对定量数据处理按比例稀释标准品,根据标准曲线确定样本初始模板浓度至少需要两个标准曲线GOI≥referencegene标准曲线确定反应扩增效率相对定量:∆∆CT法应用实例-基因表达分析实验设计流程材料和方法RNA定性及定量分析一步法&两步法设计qPCR实验方法动态温度
实时荧光定量PCR方法简介.doc
实时荧光定量PCR方法简介实时荧光定量PCR的基本原理理论上,PCR过程是按照2n(n代表PCR循环的次数)指数的方式进行模板的扩增。但在实际的PCR反应过程中,随着反应的进行由于体系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰减)使得靶序列并非按指数方式扩增,而是按线性的方式增长进入平台期。因此在起始模板量与终点的荧光信号强度间没有可靠的相关性。如采用常规的终点检测法(利用EB染色来判断扩增产物的多少,从而间接的判断起始拷贝量),即使起始模板量相同经PCR扩增、EB染色后也完全有可能得到不同的终点荧光信号强
实时荧光定量PCR方法简介.docx
实时荧光定量PCR方法简介实时荧光定量PCR的基本原理理论上,PCR过程是按照2n(n代表PCR循环的次数)指数的方式进行模板的扩增。但在实际的PCR反应过程中,随着反应的进行由于体系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰减)使得靶序列并非按指数方式扩增,而是按线性的方式增长进入平台期。因此在起始模板量与终点的荧光信号强度间没有可靠的相关性。如采用常规的终点检测法(利用EB染色来判断扩增产物的多少,从而间接的判断起始拷贝量),即使起始模板量相同经PCR扩增、EB染色后也完全有可能得到不同的终点荧光信号强
荧光定量pcr结果分析.docx
如果有标准曲线,按照标准曲线计算。一般都是相对量。则用deltadeltaCT方法来计算。举例如下:对照组基因A的CT值为20,内参(比如βactin)CT值15。实验组基因ACT值18,内参CT值14。首先算加样量:deltaCT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。基因A:deltaCT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍,所以4处以2=2,最后的相对量是2倍。几点注意:1。必须确定扩增的特异性2。只有相同目