实时荧光定量PCR方法简介.doc
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实时荧光定量PCR方法简介.doc
实时荧光定量PCR方法简介实时荧光定量PCR的基本原理理论上,PCR过程是按照2n(n代表PCR循环的次数)指数的方式进行模板的扩增。但在实际的PCR反应过程中,随着反应的进行由于体系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰减)使得靶序列并非按指数方式扩增,而是按线性的方式增长进入平台期。因此在起始模板量与终点的荧光信号强度间没有可靠的相关性。如采用常规的终点检测法(利用EB染色来判断扩增产物的多少,从而间接的判断起始拷贝量),即使起始模板量相同经PCR扩增、EB染色后也完全有可能得到不同的终点荧光信号强
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实时荧光定量PCR原理与分析方法一、综述随着生物技术的飞速发展,基因表达分析在生物医学研究领域中的地位日益重要。灵敏的分子生物学技术,广泛应用于基因表达、基因突变、病原体检测等领域。实时荧光定量PCR不仅能够实现DNA序列的精准扩增,还能在PCR反应过程中实时监测荧光信号,通过数据分析软件对未知模板进行定量分析,具有高度的特异性和准确性。本文将对实时荧光定量PCR的原理、技术方法及其应用领域进行全面综述。实时荧光定量PCR技术的原理主要基于PCR反应过程中的能量传递和荧光信号的检测。通过引入荧光染料或特异
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本发明提供了一种实时荧光定量PCR鉴别蕲蛇的方法,旨在提供一种具有操作简单、时间短、准确率高,不易造成污染的实时荧光定量PCR鉴别蕲蛇的方法,该方法依次包括下述步骤:1)引物稀释放-20℃保存备用;2)样品前处理取试样中段的肌肉组织剪碎,加入研钵中研成粉末,称取30mg至2ml灭菌离心管中;3)模板DNA提取前处理好的样品,提取DNA,置-20℃保存备用;4)配置PCR反应液配;5)加模板往上述PCR管中加入2μl提取好的DNA,加样顺序为阴性对照、待检样品、阳性对照,敲打PCR管盒,使反应液与DNA混匀