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蛋白质含量测定方法
蛋白质含量测定方法一般来说，有以下五种：凯氏定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）、紫外吸收法和考马斯亮蓝法（Bradford法）。
表五种蛋白质含量测定方法的比较方法灵敏度时间原理干扰物质说明
凯氏定氮法
（Kjedahl法）灵敏度低，适用于0.2~1.0mg氮，误差为±2％费时
8～10小时将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长
双缩脲法（Biuret法）灵敏度低
1～20mg中速
20~30分钟多肽键＋碱性Cu2＋®紫色络合物硫酸铵；
Tris缓冲液；
某些氨基酸用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似
紫外吸收法较为灵敏
50～100mg快速
5～10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收各种嘌吟和嘧啶；
各种核苷酸用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正
Folin－酚试剂法（Lowry法）灵敏度高
～5mg慢速
40～60
分钟双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原硫酸铵；
Tris缓冲液；
甘氨酸；
各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时；
颜色深浅随不同蛋白质变化
考马斯亮蓝法（Bradford法）灵敏度最高
1～5mg快速
5～15分钟考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax由465nm变为595nm强碱性缓冲液；
TritonX-100;
SDS最好的方法；
干扰物质少；
颜色稳定；
颜色深浅随不同蛋白质变化

从以上表格中可以得出，不同的方法有不同的特点和优势，如紫外吸收法测定时间快。但是综合起来，最后一种考马斯亮蓝法（Bradford法）效率最高，无论是测定时间，灵敏度还是受干扰程度，都是比较占优势的。
下面，我们来重点介绍一下其中一种蛋白质含量测定方法--凯氏定氮法。
凯氏定氮法（Kjedahl法）
首先将浓硫酸倒入样品中，边倒边摇晃，以使浓硫酸与样品充分接触，然后加热试剂。如果你需要加快实验进度，可以加入CuSO4作催化剂，这样，实验的反应时间就会大大缩短。CH2COOH和H2SO4反应生成氨气，然后氨气又与H2SO4发生作用，固定了氮元素。这时我们得到了（NH4）2SO4的溶液，然后我们可以用NaOH去跟硫酸铵反应，通过计算NaOH的使用量，就可以计算出氮的含量。下面是整个定氮法中发生的化学反应。
CH2COOH+3H2SO4=2CO2+3SO2+4H2O+NH3（1）
2NH3+H2SO4=（NH4）2SO4（2）
（NH4）2SO4+2NaOH=2H2O+Na2SO4+2NH3（3）
当我们得到氮的含量以后，我们就可以通过一定的计算，最终算出蛋白质的含量。
文章链接：中国化工仪器网http://www.chem17.com/Tech_news/detail/112216.html
蛋白质含量测定法点击次数：506发布时间：2012-8-14本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：H2OO=CC=OHNNHR-CHCH-RO=CCuC=OHNNHR-CHCH-RH2O反应（1）、（2）在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样