抗TNFα类单克隆抗体的阳离子交换色谱纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105777904A(43)申请公布日2016.07.20(21)申请号201610158251.1(22)申请日2016.03.18(66)本国优先权数据201510127563.12015.03.23CN(71)申请人广东东阳光药业有限公司地址523808广东省东莞市松山湖北部工业园工业北路1号(72)发明人洪艳杨彬马旭通林小鹊李文佳孙文正(51)Int.Cl.C07K16/24(2006.01)C07K1/18(2006.01)权利要求书1页说明书9页附图1页(54)发明名称抗TNFα类单克隆抗体的阳离子交换色谱纯化方法(57)摘要本发明公开了一种抗TNFα类单克隆抗体的阳离子交换色谱纯化方法。通过在CEX多步洗脱过程中添加尿素和甜菜碱类表面活性剂将包含抗体和污染物的混合物中的污染物去除，使多聚体与抗体分离。本发明所提供的方法污染物分离效果好；层析过程样品调节简单，避免了pH值的剧烈变化，最终纯化产物中多聚体含量显著降低。CN105777904ACN105777904A权利要求书1/1页1.抗TNFα类单克隆抗体的阳离子交换色谱纯化方法，包括对抗体进行阳离子交换色谱洗脱，其特征在于，上样平衡后，进行两次洗脱，其中第一次洗脱的洗脱液中含有0.1-0.5mol/L尿素，第二次洗脱的洗脱液中含有质量分数0.1％-1.0％的甜菜碱类表面活性剂。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的甜菜碱类表面活性剂选自十二烷基二羟乙基甜菜碱、十八烷基二羟乙基甜菜碱或椰油酰胺丙基甜菜碱。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的第一次洗脱的洗脱液为pH6.0的含0.2mol/L尿素的20mmol/LPBS缓冲液。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的第二次洗脱的洗脱液为pH5.5-6.5、含有质量分数0.1％-1.0％的甜菜碱类表面活性剂和150-200mmol/L氯化钠的20-60mmol/L柠檬酸盐缓冲液。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的柠檬酸盐缓冲液选自柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、醋酸钠-醋酸缓冲液，或磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液。6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将CHO细胞发酵表达后菌液分离；2)将发酵液用水稀释，调节pH至6.00±0.10；3)过阳离子交换柱，用含有0.1-0.5mol/L尿素的缓冲液进行第一次洗脱；用含有质量分数0.1％-1.0％的甜菜碱类表面活性剂的缓冲液进行第二次洗脱，收集洗脱组分。7.一种阿达木单克隆抗体的阳离子交换色谱纯化方法，包括对抗体进行阳离子交换色谱洗脱，其特征在于，上样平衡后，进行两次洗脱，其中第一次洗脱的洗脱液中含有0.1-0.5mol/L尿素，第二次洗脱的洗脱液中含有质量分数0.1％-1.0％的甜菜碱类表面活性剂。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的甜菜碱类表面活性剂选自十二烷基二羟乙基甜菜碱、十八烷基二羟乙基甜菜碱或椰油酰胺丙基甜菜碱。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的第一次洗脱的洗脱液为pH6.0的含0.2mol/L尿素的20mmol/LPBS缓冲液。10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的第二次洗脱的洗脱液为pH5.5-6.5、含有质量分数0.1％-1.0％的甜菜碱类表面活性剂和150-200mmol/L氯化钠的20-60mmol/L柠檬酸盐缓冲液。11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的柠檬酸盐缓冲液选自柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、醋酸钠-醋酸缓冲液或磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液。12.根据权利要求7-11任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将CHO细胞发酵表达后菌液分离；2)将发酵液用水稀释，调节pH至6.00±0.10；3)过阳离子交换柱，用含有0.1-0.5mol/L尿素的缓冲液进行第一次洗脱；用含有质量分数0.1％-1.0％的甜菜碱类表面活性剂的缓冲液进行第二次洗脱，收集洗脱组分。2CN105777904A说明书1/9页抗TNFα类单克隆抗体的阳离子交换色谱纯化方法技术领域[0001]本发明涉及单克隆抗体制备，具体涉及抗TNFα类单克隆抗体的阳离子交换色谱纯化方法。背景技术[0002]抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)单克隆抗体(McAb)在临床治疗败血症休克、类风湿性关节炎等疾病中有广泛的应用前景,如英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)、Golimumab都是TNFα类抗体。其中阿达木单抗是全球首个被批准的抗肿瘤坏死因子α(TNFα)全人源单克隆抗体。阿达木单抗可阻止TNFα与其细胞