一种新的核酸提取试剂及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108410951A(43)申请公布日2018.08.17(21)申请号201810505203.4(22)申请日2018.05.24(71)申请人苏州先达基因科技有限公司地址215000江苏省苏州市吴中经济开发区越溪街道吴中大道2888号6幢601室(72)发明人高山珊张杨黄凯于继彬(74)专利代理机构苏州翔远专利代理事务所(普通合伙)32251代理人陆金星(51)Int.Cl.C12Q1/6806(2018.01)C12Q1/6844(2018.01)权利要求书1页说明书13页序列表1页附图2页(54)发明名称一种新的核酸提取试剂及其应用(57)摘要本发明公开了一种用于低温核酸扩增的样品核酸快速提取试剂及其应用方法。核酸提取试剂包括样品处理试剂、核酸吸附棒和漂洗液。将待检样品与提取试剂以1:1-1:10的比例混合，在热水（约60℃-100℃）下水浴1分钟后所得的溶液在纤维素核酸吸附棒的转移下经过漂洗后可直接用于低温核酸扩增检测。本发明核酸提取试剂使用安全简便，成本低廉，结合重组酶聚合酶扩增技术，能够在非实验室条件下对细菌、昆虫、各种动物组织、法医样品（口腔细胞、毛发、尿液、唾液、血液、组织样品）及组织中的细菌和病毒等分子生物学样品进行检测。CN108410951ACN108410951A权利要求书1/1页1.一种用于核酸提取的样品处理试剂，其特征在于包含如下三种成分：终浓度为0.2mM-1mM的离子型表面活性剂；终浓度为0.1%-10%的吐温-20或TritonX-100或其组合；终浓度为0.05-0.5mol/L的NaOH。2.一种用于核酸提取的样品处理试剂，其特征在于所述离子型表面活性剂为3-（三甲氧基甲硅烷基）丙基二甲基十八烷基氯化铵。3.一种核酸提取试剂，其特征在于包含权利要求1或2任一项所述的样品处理试剂，核酸吸附棒和漂洗液。4.权利要求3所述的核酸提取试剂，其特征在于所述核酸吸附棒基质材料为介质表面存在游离羟基的材料，优选为纤维素材料；例如，纤维素滤纸或纤维素基质。5.权利要求3或4任一项所述的核酸提取试剂，其特征在于所述漂洗液选自5mM-50mM的TRIS-Ac盐类缓冲液、PBS或TE，PH介于6.5-9.0之间。6.一种提取样品中核酸的方法，包括如下步骤：（1）将样品与权利要求1或2所述的样品处理试剂接触；（2）用核酸吸附棒在步骤（1）的离心管中蘸取；（3）将步骤（2）蘸取后的核酸吸附棒在漂洗液中蘸取。7.权利要求6所述的提取样品核酸的方法，其特征在于在所述步骤（1）接触之后对样品-样品处理试剂混合物进行热处理，热处理的温度为60℃-100℃，时间为1-3分钟；优选为65℃水浴1分钟。8.权利要求6或7任一项所述的提取样品核酸的方法，其特征在于所述待检样品与样品处理试剂的体积比为1:1-1:10。9.权利要求1-8任一项所述的试剂或方法在基于重组酶聚合酶低温核酸扩增技术中的应用，其特征在于利用大肠杆菌重组RecA或T4uvsX或它们的类似物或衍生物、单链结合蛋白、聚合酶介导的重组扩增反应。2CN108410951A说明书1/13页一种新的核酸提取试剂及其应用技术领域[0001]本发明涉及一种用于低温核酸扩增技术释放样品核酸的方法，属于分子生物学技术领域。背景技术[0002]分子诊断与核酸检测已广泛地应用于传染病或遗传病诊断、无创产前基因检测、流行病学调查、致病微生物检测、科学研究等领域，它比免疫学检测技术灵敏度更高,结果更准确、可靠[1]。然而，分子诊断首先需要进行核酸提取，核酸提取技术目前还只是专业人员掌握的专业性技术，随着基于核酸水平的检测技术及临床诊断技术迅猛发展，如今急需一种简便的现场DNA释放并检验的方法，能够广泛应用于基层医院、检测现场甚至大众家庭中的核酸提取或释放技术，进而结合更为方便的低温核酸扩增技术，实现对样本的快速检测，从而让基层医院、畜牧饲养技术指导中心、市场监督管理部门、甚至普通大众能够自行进行传染病原的检测、遗传基因分型测试等等[2,3]。[0003]核酸在细胞中总是与组蛋白等有机物结合在一起，核酸的提取首先需要将细胞裂解，而后将核酸与蛋白质、多糖、脂质等大分子有机物分离开来，并且要保持核酸一级结构的完整性。经过近几十年的发展，核酸的提取主要分为三种方法：酚氯仿提取法（酚氯仿法），二氧化硅膜离心吸附柱提取法（吸附柱法），二氧化硅表面修饰磁性颗粒吸附核酸提取法（磁珠法）[4]。最初的酚氯仿法操作复杂、耗时长，而且提取的核酸含量不稳定，在临床基因检测和实验室研究当中已经很少使用。吸附柱法广泛的应用到临床基因检测和实验室的研究工作中，市场上有多种专业试剂盒可供使用，它具有提取核酸的纯度高、含量稳定等优点，但是这