核酸释放剂及其核酸释放方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113930418A(43)申请公布日2022.01.14(21)申请号202111196322.4(22)申请日2021.10.14(71)申请人杭州迪安生物技术有限公司地址311121浙江省杭州市余杭区仓前街道海曙路11号5层(72)发明人焦明超董伟斌倪晓龙(74)专利代理机构无锡市汇诚永信专利代理事务所(普通合伙)32260代理人倪杨(51)Int.Cl.C12N15/10(2006.01)权利要求书1页说明书11页附图13页(54)发明名称核酸释放剂及其核酸释放方法(57)摘要本发明涉及核酸释放剂及其核酸释放方法，该方案包括0.5‑1.5MTris‑HCl、30‑70mMEDTA、0.5‑1.5M半胱氨酸、10‑30U/μLRRI、DEPC水以及体积百分比浓度为15‑30％的NP‑40、体积百分比浓度为3‑7％的PolyA，其中RRI为RNA酶抑制剂。将所述核酸释放剂平衡至室温后摇匀；取摇匀后的所述核酸释放剂加入至PCR反应管；再加入待测样本并吹打混匀得到目的核酸，其中所述核酸释放剂与所述待测样本的体积比为1:3。本申请具有回收率高、操作简单及生产成本低的优点。CN113930418ACN113930418A权利要求书1/1页1.核酸释放剂，其特征在于，包括0.5‑1.5MTris‑HCl、30‑70mMEDTA、0.5‑1.5M半胱氨酸、10‑30U/μLRRI、DEPC水以及体积百分比浓度为15‑30％的NP‑40、体积百分比浓度为3‑7％的PolyA，其中RRI为RNA酶抑制剂。2.根据权利要求1所述的核酸释放剂，其特征在于，由1MTris‑HCl、50mMEDTA、1M半胱氨酸、20U/μLRRI、DEPC水以及体积百分比浓度为25％的NP‑40、体积百分比浓度为5％的PolyA组成。3.根据权利要求1所述的核酸释放剂，其特征在于，PolyA作为核酸助沉剂，半胱氨酸与NP‑40作为非离子活性剂来配合PolyA来释放核酸。4.核酸释放方法，其特征在于，采用权利要求1到3任一所述的核酸释放剂，具体包括以下步骤：将所述核酸释放剂平衡至室温后摇匀；取摇匀后的所述核酸释放剂加入至PCR反应管；再加入待测样本并吹打混匀得到目的核酸，其中所述核酸释放剂与所述待测样本的体积比为1:3。5.根据权利要求4所述的核酸释放方法，其特征在于，所述待测样本包括全血、血清、血浆或分泌物。6.根据权利要求4所述的核酸释放方法，其特征在于，所述目的核酸为DNA或RNA。7.根据权利要求4所述的核酸释放方法，其特征在于，所述核酸释放剂的配制方法如下：分别取1μL的1MTris‑HCl、0.4μL的50mMEDTA、0.2μL的半胱氨酸、0.2μL的体积百分比浓度为25％的NP‑40、0.2μL的体积百分比浓度为5％的PolyA、0.04μL的20U/μLRRI及7.96μL的DEPC水充分混匀制成。8.根据权利要求4所述的核酸释放方法，其特征在于，应用于核酸的PCR检测。9.根据权利要求4所述的核酸释放方法，其特征在于，核酸释放剂释放的时间为1‑3分钟。2CN113930418A说明书1/11页核酸释放剂及其核酸释放方法技术领域[0001]本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及核酸释放剂及其核酸释放方法。背景技术[0002]PCR(PolymeraseChainReaction，聚合酶链式反应)是一种用于扩增特定的核酸片段的分子生物学技术，其最大特点是能将微量的核酸进行大量的富集和增加，从而达到便于检测微量核酸的目的。其中在医学诊断上常用的PCR方法主要是基于双荧光探针的实时荧光定量PCR(qPCR)方法，利用qPCR方法进行体外诊断的靶标主要包括人基因组DNA、DNA病毒、细菌、真菌和RNA病毒等。由于RNA的结构为单链结构，不稳定且容易降解，因此在样品的处理过程当中要求非常高，需要较为复杂的方法对待扩增的RNA样品进行前处理和核酸提取并纯化，得到纯净的核酸后，方能进行检测得到稳定的结果。[0003]为此，目前应用于荧光定量PCR扩增的核酸提取方法主要有以下4种：[0004](1)传统煮沸法：裂解液与血液样本混匀，高温裂解，离心得到核酸；[0005](2)浓缩煮沸法：先用多聚糖浓缩沉淀病毒核酸，再加裂解液煮沸，离心得到核酸；[0006](3)离心柱法：裂解后采用层析柱吸附核酸、再洗脱得到较纯的核酸；[0007](4)磁珠法：用磁珠吸附核酸，再洗脱得到较纯的核酸。[0008]上述前2种提取方法缺点是需要多次转管、移液、离心等步骤，样本处理耗时长，且在高温处理的操作中难免会丢失部分核酸，使最终用于PCR扩增的核酸样本的运量值偏低。而离心柱法虽然比上述两种煮沸法提取的核酸纯