质谱技术(2006).ppt

第三章质谱技术内容：第一节质谱学基础第二节高效液相色谱－质谱(HPLC-APIMS)LC－MS联用所面临的两大问题LC/MS电离技术的相对适用性HPLC-ESIMS(电喷雾电离)电喷雾电离源API-ElectrosprayIonSource电喷雾电离－离子形成的必要步骤步骤1－在溶液中如何产生离子？步骤2－气动辅助电喷雾－产生带电液滴步骤3－带电液滴的去溶剂液滴的Con’t库仑分裂步骤4－从溶液中解吸离子帽电压样品
在溶液中为离子态:儿茶酚胺、硫酸酯共轭物、丁基胺
有可诱导电离的化合物：甲醇
含杂原子的化合物：氨基甲酸酯类，苯并二氮杂草类
溶液中带多电荷：蛋白质、多肽、低聚核甘酸

溶液化学参数
流速
样品的pK,溶液pH
溶液导电性
应避免的样品
尤其非极性的样品：PAHs,PCBs
[溶剂+H]++A

溶剂+[A+H]+APCI离子化机理APCI离子化机理APCI离子源HPLC流速>500L/min
雾化气压力
60psig
干燥气温度
startwith350C干燥气流速
4L/min气化温度
随FIA调节
帽电压
随FIA调节(2000-6000)
开始2500V
电晕电流
随FIA调节
开始25µA(neg)或4µA(pos)样品
分子量和极性中等的化合物：PAHs,PCBs,脂肪酸,邻苯二甲酸酯类；
不含酸性和碱性位点的化合物（碳氢化合物、醇、醛、酮和酯）；
含有杂原子的化合物：脲、苯并二氮杂草、氨基甲酸酯；
具有一定挥发性的化合物,排除了分子量较大和极性较大的分子,如蛋白质/多肽；
电喷雾响应不好的样品；

溶液化学参数
较ES对溶液化学作用不灵敏
较ES更耐大的流速
适用ES不宜的一些溶剂

应避免的样品
在气化过程中热不稳定的化合物电喷雾电离:其电离过程通过电场产生带电液滴，接着样品离子通过离子蒸发后，进行质谱分析。适用于在溶液中为离子态或可诱导电离的化合物。适用于分子量较大和极性较大的分子,如蛋白质/多肽；

大气压化学电离(APCI):气相化学电离(CI)过程中溶剂相当于CI反应气来使样品电离。适用于分子量和极性中等的化合物和具有一定挥发性的化合物,排除了分子量较大和极性较大的分子。HPLC－APIMS方法开发HPLC－MS用途样品前处理
质谱检测条件
检测离子模式，离子化参数设定
液相色谱条件
ESI液质分析
APCI液质分析
样品导入方式
Infusion,HPLC,FIA
柱后修饰技术样品前处理质谱条件-离子源选择（1）质谱条件-离子源选择（2）质谱条件-离子模式选择质谱条件-API参数设定液相方法转为液质联用需要考虑：液相条件-选择相应的色谱柱液相条件-色谱柱内径选择液相条件-色谱柱颗粒度选择液相条件-色谱柱长度选择液相条件-流速液相条件–与API-MS匹配的溶剂液相条件–常用缓冲盐(挥发性)HPLC条件–液相分离模式第三节生物质谱简介生物质谱分析过程2DGelPrinciplesIonizationMethods生物质谱的应用多电荷质谱图的解析-反卷积(Deconvolute)确定电荷状态：
假设m1和m2这一对离子是同一离子的两个电荷状态（n1和n2），这里n2=n1-1
假设加合离子质量x。(H+在这个例子中，质量=1)
对二个离子计算电荷状态n2。如果这些峰相关，它必定为整数。n2=(m1-x)/(m2-m1)=(694.0-1)/(867.3-694)=4n2=4计算分子量，M
若X=H=1.0
M=n2(m2-x) = 4(867.3-1)=3465.2
对另一对峰重复计算
n2=(578.5-1)/(694.0-578.5)=5
M=5(694.0-1)=3465.0

如果满足下面条件，则另一对离子是相关的：
在满足前面一对离子的正确的系列中计算出整数电荷状态
计算出的分子量与前面一对离子得到的分子量足够相近反卷积过程－以人类生长激素为例（MW22125.7）对目标预期分子量选择加合离子和参数对目标预期分子量选择加合离子和参数
点击反卷积－质谱图（Deconvolute-MassSpectra）在谱图中找到多电荷成分点击反卷积－查看（Deconvolute-view）得到结果的详细列表在反卷积－电荷状态标尺（deconvolution-chargestateruler）下选择可以手动反卷积所选择的质谱图
选择加合离子子和所需电荷状态移动至电荷状态（15），点击鼠标左键分子量－以m/z值、电荷状态和加合离子计算分子量
平均质量－平均反卷积中找到的所有信号的化合物质量值进行
Pred峰（平均）－除以平均质量和电荷值，加上加合质量计算
化合物质量－计算（实际峰－加合离子）x电荷
电荷－质谱图中实际峰的电荷状态