质谱及液质联用技术的应用.ppt

质谱及液质联用技术的应用主要内容发展概述质谱分析的原理质谱分析过程质谱仪的组成真空系统离子源软电离技术电喷雾通常应用于FT2MS。Little等利用FT2MS对一个50链寡聚糖核苷酸得到了优于10μg/g的质量测定准确度;对一个100链寡聚核苷酸,质量准确度优于30μg/g。测定的寡聚物的分子量可用于顺序确证,也可与气相裂解结合来进行序列测定。ChenR等用FT2ICR2MS来捕获和检测质量超过108D的单个DNA离子。ESI的优点是:解决了极性大、热不稳定的蛋白质与多肽分子的离子化和大分子质量、一级结构和共价修饰位点的测定问题,并可用于研究DNA与药物、金属离子、蛋白质和抗原与抗体的相互作用。但是样品中的盐类对样品结果影响很大,而且单个分子带电荷不同可形成多种离子分子峰(重叠峰),所以对混合物的图谱解析比较困难。基质辅助激光解吸电离技术(MALDI)是用小分子有机物作为基质,样品与基质的分子数比例为1:(10050000),均匀混合后,在空气中自然干燥后送入离子源内。混合物在真空下受激光辐照,基质吸收激光能量,并转变为基质的电子激发能,瞬间使基质由固态转变为气态,形成基质离子。而中性样品与基质离子、质子及金属阳离子之间的碰撞过程中,发生了样品的离子化,从而产生质子化分子、阳离子化分子或多电荷离子或多聚体离子。常用的是基质辅助激光解吸离子-飞行时间-质谱。目前还有更新的串联飞行时间质谱技术。Crimmins等用MALDI-TOFMS分析通过二硫键键合的异二肽,得到了二肽及每个单体肽组分的质量。结论是MALDI-TOFMS中的碎裂过程与氨基酸胱氨酸水溶液的光引发均裂有相似之处。提供了一种指认蛋白中二硫键的简便方法。此方法还适用于对单核细胞进行直接的化学分析。MALDI的特点是准分子离子峰很强,几乎无碎片离子,因此可直接分析蛋白质酶解后产生的多肽混合物。另一个特点是对样品中杂质的耐受量较大,当用液体色谱分离蛋白质是,往往把盐留在样品中,若这些盐的量在基质的5%以下,可不影响蛋白质离子的发射,因而往往可省去脱盐的步骤,大大缩短分析时间。质量分析器检测接收器色谱质谱联用简介液质联用与气质联用的区别LC-MS联用技术的发展液相色谱--质谱仪自1968年发表第一篇HPLC和MS在线联用的实验报告至90年代初形成的5种接口类型的商品仪器,经历了30年。LC-MS经历了一个漫长的研究过程,主要是为了解决真空技术和性能优越的接口技术。为解决质谱分析所必须的真空度,LC-MS一般都采用分段、多级抽真空的方法。与GC-MS联用相比,接口问题的解决过程是艰巨的。主要原因来自两方面:一是真空;二是样品性质。也就是说质谱仪的高真空系统不适应HPLC的流出液体；强极性、难汽化和热不稳定的样品不适应质谱的常规进样和离子化方式。LC-MS在发展的过程中曾出现了很多接口技术,现在在线联用接口汇集成商品化的5种接口为传送带(MB)、流动快原子轰击(CFFAB)、粒子束(PB)、热喷雾(TSP)以及大气压电离(API)。其中API技术尽管不能全部代替其他4种接口,但它的出现使HPLC方法可以对强极性、高熔点、低挥发性和热不稳定性样品进行分析,因此逐渐受到法庭科学工作者的青睐。API技术分为电喷雾电离(ESI)、大气压化学电离(APCI),目前商业化的LC-MS绝大多数使用这两种接口,下面简单介绍这两种接口的特点。1.电喷雾电离(ESI)ESI是高电压加在毛细管喷口上,通过电动喷雾,雾化的液滴经去溶剂化最终成为样品的准分子离子,电喷雾由此而得名。ESI有正离子化和负离子化两种模式可供选择,碱性样品一般选择正离子化模式,酸性样品一般选择负离子化模式。具有离子化效率高、灵敏度高、分析范围广等优点。它可以形成多电荷离子分析大分子如多肽、蛋白质等,也可形成单电荷离子分析较小分子量(<1000amu)的极性化合物,如小分子药物及其代谢物,用于农药及化工产品的中间体和杂质的鉴定。2.大气压化学电离(APCI)APCI是样品进入气相后依赖电晕放电发生离子化。被分析物随溶液一起通过不锈钢探针,同时被加热气化,其溶胶进入离子源,借助电晕放电而带电,随后分子、离子之间进行电荷转移(化学反应)使被反应物带电与GC-MS不同的是并不需要反应气。与ESI相比,所要求的液相色谱流动相流速可在0.2ml/min-2ml/min,这样对于选择色谱柱和优化色谱条件十分方便,而要求流动相流速控制在1.0ml/min以下。但是APCI不能形成多电子离子,这使得它的质量分析范围没有ESI广,有些化合物使用两种接口技术均可进行分析,一般极性低的化合物多使用接口APCI,APCI的灵敏度较ESI好。1.接口的选择：ESI适合于中等极性到强极性的化合物分子，特别是那些在溶液中能预先形成离子的化合物和可以获得多个质