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HPLC法测定蔓荆子黄素的含量
更新日期：2009-07-29点击：王坤*管玉民

摘要以蔓荆子黄素为指标，用反相HPLC法测定了蔓荆子中的含量，实验采用C18柱，以甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40)为流动相，检测波长258nm，用外标法测定，回收率为98.18%，RSD1.46%，线性范围0.15～0.75μg。本法快速简便，重现性好，为蔓荆子质量控制提供了可靠的依据。
关键词蔓荆子蔓荆子黄素HPLC含量测定

蔓荆子为单叶蔓荆VitextrifoliaL.var.simplicifoliaCham或蔓荆V.trifoliaL.的干燥成熟果实，具有疏散风热，清利头目之功效〔1〕，是用于风热感冒头痛的常用药。至今为止，各版药典蔓荆子项下，均没有含量测定指标。蔓荆子黄素是蔓荆子的主要化学成分〔2〕，目前尚未见用HPLC测定蔓荆子黄素的含量报道。我们以蔓荆子黄素为指标对蔓荆子进行了含量测定，方法快速简便，重现性好，回收率为98.18%。

1仪器与试药

SP-8800高效液相色谱仪，SP-200型紫外检测，10μL标准定量进样环。蔓荆子黄素自提，经光谱鉴定，并经HPLC分析为单一峰，纯度为98.46%。所用试剂为色谱纯或分析纯，蔓荆子购于本地药店。

2方法与结果

2.1色谱条件：色谱柱4.6mm×250mmC18，流动相甲醇-0.4%磷酸溶液(60∶40)，检测波长258nm，流速1.0mL/min，进样量10μL，柱温32℃，CS0.25，衰减64。在此条件下蔓荆子黄素与样品中其它成分达到较好的分离。
2.2标准曲线的制备：精密称取干燥至恒重的蔓荆子黄素对照品15mg，置100mL量瓶中，甲醇溶解定容，作为对照品溶液。分别精密吸取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，照上述条件测定，以蔓荆子黄素的峰面积积分值为纵坐标，蔓荆子黄素对照品的量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：C＝2.225×10-7A－4.72×10－4，r＝0.9999。峰面积值与进样量的线性范围为0.15～0.75μg。
2.3样品的测定：取蔓荆子(中粉，过4号筛)2g，置索氏提取器中，加石油醚(60℃～90℃)适量，回流提取3h，弃去石油醚液，挥干，加甲醇适量置水浴上回流提取4h，甲醇提取液浓缩至约25mL，定量转移至50mL容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀用0.45μm滤膜过滤，分别吸取此液和对照品溶液(30mg/mL)进样测定。计算含量为0.075%(n＝5)，RSD＝1.63%，结果见表1。

表1样品测定结果

序号样品中蔓荆子黄素的含量(%)(%)RSD(%)
10.074

20.0750.0751.63
30.076
40.073
50.075

2.4回收率试验：精密称取已知含量的蔓荆子粉末约1g(含0.075%蔓荆子黄素)，加入蔓荆子黄素对照品0.75mg，按照样品测定项下进行处理，测定，计算回收率，结果平均回收率：98.18%，RSD＝1.46%。
2.5精密度试验：在上述色谱条件下，对同一浓度的对照品溶液连续6次进样，得峰面积为1392487.5，RSD为0.945%。
2.6重现性试验：按照样品测定方法，对同一批号样品进行5次平行试验，蔓荆子黄素的含量RSD为1.72%。
2.6稳定性试验：在室温条件下，将样品溶液在1、2、3、4、12、24h进样测定，含量不变，说明样品溶液在24h内稳定。

3讨论

3.1蔓荆子含有较多的油脂，蔓荆子黄素又不溶于石油醚，因此，用石油醚脱脂后有利于提取测定，石油醚提取液进样无蔓荆子黄素。
3.2我们曾对超声、冷浸、加热回流等提取方法进行比较，结果，以索氏提取器加热回流提取测得的蔓荆子黄素含量最高。

*Address:WangKun,ShandongProvincialInstituteforDrugControl,Jinan
作者单位：王坤管玉民山东省药品检验所(济南250012)

参考文献

[1]中华人民共和国药典(一部).1995：322
[2]GomaCS,etal.PlantaMed,1978，33(3):277